病毒学第四、五章.pptVIP

病 毒 学 第四章 理化因子对病毒的作用 适度的理化因子作用：有助于保持病毒的感染性 在“质”和“量”上控制理化因子：可导致病毒发生变异，获得病毒的突变体 剧烈的理化因子作用：病毒失去感染力，被灭活 不同病毒因其结构和组成不同，对理化因子的作用可呈现不同的反应（敏感或有抗性） 病毒的特征性表现，是病毒鉴定的一个重要依据 对选择有效消毒方法、病毒材料或毒种的保存、筛选疫苗、病毒提纯均有意义。 1.温度（T） （1）病毒耐冷怕热 大多数病毒55-60℃几分钟到几十分钟灭活； 0 ℃ 下可保持稳定，特别是干冰温度和液氮温度下能长期保持感染性。 不同温度下，病毒感染的半衰期不同： 60 ℃以秒计，37 ℃以分计，20 ℃以小时计，4 ℃以天计，-70 ℃以月计，-196 ℃以年计 不同病毒对热的抵抗力不同，甚至有明显差别，有包膜病毒对热的抵抗力较裸露的二十面体病毒差。 （2）热对病毒的作用机理 主要使病毒蛋白质，特别是病毒的表面蛋白质变性，结果导致病毒体不能吸附于细胞受体，或病毒不能脱壳，或病毒体中所携带的酶失活，从而影响核酸的正常逸出，失去感染性。 包膜在高温条件下可能发生降解。 一般来说，蛋白质比核酸容易因热变性。核酸位于病毒体内部，热的作用已被蛋白质外壳缓冲；但在70℃以上温度可使双链核酸发生链性分离，随后在核酸的糖-磷酸骨架的某处断裂。 轻度加热（40-50 ℃ ）：蛋白质的完整性发生破坏，丧失感染性，但常继续保持免疫原性。 更高温加热（60 ℃以上）：蛋白质发生凝固，感染性和免疫原性均丧失。 （3）温度对病毒的灭活作用受周围环境的影响 蛋白质、Ca2+、Mg2+存在可提高某些病毒的热稳定性；它们在1M浓度的盐类溶液中，甚至50℃加热1h也不灭活。 蛋白酶和核酸酶存在可提高热对病毒的灭活作用 冻融，特别是反复冻融，常可使许多病毒发生较大程度的灭活。 （4）病毒的保存方法 快速低温冷冻 病毒悬液中+灭活的正常动物血清或其它蛋白保护剂，迅速冷冻到-70℃或-196 ℃ 。 含病毒的组织材料（病料） 直接低温冷冻 +50%甘油缓冲盐水，迅速冷冻到-70℃或-196 ℃ 。 含病毒的细菌材料+30%甘油缓冲盐水，迅速冷冻到-70℃或-196 ℃ 。 真空冷冻干燥 在真空条件下，使冰冻的病毒悬液脱水。通常是用低温脱水法，并以干燥剂或冷凝法除去冷凝器内尚未凝结的多余水汽。 常用干燥剂：P2O5、CaSO4、CaCl2、硅胶 病毒冷冻保护剂：脱脂牛乳（最常用）、灭活正常动物血清、饱和蔗糖溶液等。 （1）一般病毒耐pH以5-9为标准，5以下9以上大多迅速灭活；大多数在pH6-8保持稳定。 （2）不同种类病毒对pH变化稳定性不同（保持感染性的pH值不同）——病毒鉴定指标 有的病毒耐酸，是否耐酸以pH3为标准。 （3）应用 实践中，用酸、碱溶液作消毒剂。 病毒保存中，以中性或稍偏碱为宜。 3.辐射 （1）种类 电离辐射 X射线 γ射线 很易灭活病毒 非电离辐射 （2）机理 电离辐射 病毒核酸链共价键发生断裂 单链核酸对电离辐射的作用更为敏感 对病毒蛋白质也有破坏作用 引起液体介质电离所产生的H+、OH-和过氧化物等，起间接灭活作用。 紫外线 使核酸发生多种结构形式的变化，其中以形成嘧啶二聚体为主。 4.干燥 干燥效果与使用方法和病毒种类有关系。 有包膜病毒对干燥抵抗力更弱。 5.染料的光动力作用 （ 1）概念：某些病毒在可见光存在的条件下，经中性红、美蓝、台酚蓝和甲苯胺蓝等染料处理就可能迅速失去感染性。 （2）机理 由于这些染料易于渗透病毒体的蛋白质外壳而与核酸结合，造成核酸结构的破坏，丧失感染性；而对蛋白质无严重损害，一般能保持免疫原性。 必须在有氧的条件下进行 6.化学物质 （1）脂溶剂：乙醚、氯仿和丙酮以及其它可以脱脂的化学剂 有包膜病毒因包膜上含较多脂类物质，表现对脂溶剂敏感，但对不同脂溶剂敏感程度不同 无包膜病毒（包括少数含脂质成分的无包膜病毒）对脂溶剂不敏感 乙醚灭活试验——鉴别病毒有无包膜 （2）蛋白变性剂 种类：石炭酸、阴离子去污剂、非离子去污剂及尿素、胍等蛋白变性剂 机理： SDS：解离壳体蛋白，释放出核酸，并使病毒蛋白质降解为多肽，还能溶解包膜。 吐温、脱氧胆酸钠：破坏包膜结构，保存蛋白结构和抗原性 高浓度