临床级别人诱导的多潜能干细胞的建立与鉴定生物学发育生物学专业论文.docxVIP

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临床级别人诱导的多潜能干细胞的建立与鉴定生物学发育生物学专业论文.docx

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临床级别人诱导的多潜能干细胞的建立与鉴定生物学发育生物学专业论文

CONTENTSCoNTENTS CONTENTS CoNTENTS Abstract in Chinese ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． I Abstract in English ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．V 1 Introduction ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 1 1．1 Stem cells．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 1．2 Pluripotent stem cells．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 2 1．2．1 Embryonic stem cells．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．-．- 2 1．2．2 Induced pluripotent stem cells ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 5 1．2．3 Basic research ofclinicl application in pluripotent stem cells．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10 1．3 Potential application prospects of stem cells．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 12 1．4 Current clinical application situation of stem cells ．14 1．5 Advantages ofclinical application ofinduced pluripotent stem cells．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16 1．6 Standards for clinical．grade stem cells．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 17 1．7 Requirements ofclinical-grade human pluripotent stem cells ．．．19 1．8 The purpose and significance ofthis study ．20 2 Materials and methods ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21 2．1 Materials ．21 2．1．1 Informed donor consent 一2l 2．1．2Animals．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21 2．1．3 Equipments ．．21 2．1．4 Reagents ．22 2．1．5 Commen reagent preparation 25 2．2 Methods 。．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28 2．2．1 Cell Culture ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28 2．2．2 Plasmid extraction ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30 2．2．3 Lentivirus package 3 1 2．2．4 Derivation ofhuman induced pluripotent stem cells by lentivirus ．．．．．．．．．．．．．．．．．32 2．2．5 Derivation ofhuman induced pluripotent stem ceils by PCEP4-OSKN episomal．．．．．．．．．32 2．2．6 Derivation of clinical．grade human induced pluripotent stem cells by sendai virus 32 2．2．7 Pluripotency cahracterization ．．．．．．．．．．．．．．．