e3连接酶trim26通过泛素化降解核内的irf3负向调控ifnβ的产生和抗病毒免疫反应免疫学专业论文.docxVIP

山东大学博士学位论文IN【lEX 山东大学博士学位论文 IN【lEX Chinese Abstract ．1 Eng]ish Abstract ．13 Abbreviation 20 Text Introduction ．．22 Material andMethods 27 Results ．．48 Conclusion and Discussion ．．69 Reference ．．73 Review ．．78 Published research papers ．．91 Paperl ．93 Paper2 131 Acknowledgement ．．156 万方数据 山东大学博上学位论文E3连接酶TRIM26通过泛素化降解核内的IRF3负向调控IFN．P的产生 山东大学博上学位论文 E3连接酶TRIM26通过泛素化降解核内的IRF3负向调控IFN．P的产生 和抗病毒免疫 博士生：王鹏 导师：高成江教授 专业：免疫学 中文摘要 天然免疫是宿主抵抗病原微生物入侵的第一道防线，天然免疫应答的活化， 主要是通过模式识别受体(pattern-recognition receptors，PRRs)识别病原体相关 分子模式(pathogen．associated molecular paRems，PAMPs)，从而激活一系列相 关的信号转导通路，发挥免疫应答作用。PRRs主要包括Toll样受体(Toll．1ike receptors，TLRs)，维甲酸诱导的基因I样受体(RIG．I．1ike receptors，RLRs)，NOD 样受体(NOD．1ike receptors，NLRs)以及DNA受体。在天然抗病毒免疫中，I 型干扰素的产生对于机体的抗病毒作用是非常重要的，机体受到病毒感染后，会 引起转录因子IRF3的活化，从而引起下游的I型干扰素的产生。I型干扰素产生 之后与相应受体结合，引起干扰素诱导基因产物(ISG)的表达，产生的众多干扰 素相关蛋白分子主要起到抵抗病毒感染的作用，通过抑制病毒的复制或是通过凋 亡途径引起被感染细胞的凋亡，协同发挥着抗病毒作用。因此，I型干扰素对于 机体的抗病毒作用是至关重要的。I型干扰素的产生主要依赖于转录因子IRF3 的活化，IRF3作为机体重要的转录因子，在I型干扰素产生以及机体各信号通 路发挥抗病毒作用中都是至关重要的。与此同时，IRF3作为机体抗病毒作用中 非常重要的转录因子，IRF3的活化需要磷酸化，二聚化以及核转位共同的参与， 然而对于核内活化形式IRF3的调节作用的研究目前来说还是不明确的。 目前已有文章报道显示去磷酸化以及泛素化可以抑制转录因子IRF3的活 性，接头分子RACKl可以募集磷酸酶PP2A对磷酸化的IRF3进行去磷酸化作 万方数据 山东大学博士学位论文用。也有文章报道，在SeV感染情况下，IRF3 山东大学博士学位论文 用。也有文章报道，在SeV感染情况下，IRF3 C末端的磷酸化可以促进IRF3 的蛋白酶体降解作用。但是，目前来说尚未明确能够泛素化和降解核内IRF3的 E3连接酶。TRIM26分子属于tripartite motif(TRIM)E3连接酶家族中的一员， 在人类中，TRIM家族大约有超过70个成员。TRIM家族成员拥有相似的结构特 点，主要包括N末端的一个RING结构域，一个或是两个B-boxes结构域，以 及一个coiled coil结构域，C末端是一个可变结构域。目前已有很多报道发现E3 连接酶在TLR，RLR,NLR以及DNA信号通路中发挥着重要作用，E3连接酶主要 通过不同的蛋白质修饰调节众多信号通路中的接头分子的蛋白质表达水平或是 蛋白活性的变化，从而起到影响相应信号通路活性的作用。E3连接酶通常以I(48 偶联的泛素化形式通过蛋白酶体途径降解相应的接头分子，也可以通过K63偶 联的方式影响相应的蛋白质分子的活性，同时E3连接酶也可以通过其他的泛素 化形式如Kll，K27等方式影响信号通路的活化。虽然目前已有很多关于E3连 接酶在信号通路中的调节机制被发现，但是关于E3连接酶如何参与到核内IRF3 的活性调节还没有明确的报道。 一．研究目的： TRIM26作为TRIM家族中重要的一员，之前在天然免疫中的研究是非常少 的，鉴于TRIM家族的相似结构特点，考虑TRIM26作为一种E3连接酶是否会 在天然免疫应答中起到泛素化修饰的作用，是否参与到TLR，RLR,NLR以及DNA 信号通路介导的I型干扰素的产生之中，并对机体的抗病毒免疫起到调控作用， 同时验证TRIM26作用的靶分子以及是通过何种形式的泛素化形式起到相应的 作用。 二．研究方法： 1．病毒感染对TRIM26的调控 1．1病毒感染对TRIM26表达的影响 取小鼠的各种组织，利用Weste