第二单元 原料处理技术.ppt

第二单元 原料预处理技术 学习目标 1.发酵液预处理的目的和主要方法及其原理。 2.常用的细胞破碎方法及原理。 3.生物分离常用的离心、过滤方法。 第一节 概述 微生物发酵或动植物细胞培养结束后，发酵液(或培养液)中除含有所需的生物活性物质外，还存在大量的菌体、细胞、胞内外代谢产物及剩余的培养基成分等。 常规处理方法 先将菌体或细胞、固态培养基等固体悬浮颗粒与可溶性组分分离(即固-液分离)，然后再进行后续的分离纯化操作单元。 对于胞内产物来说，应先经细胞破碎，使生物活性物质转移到液相后，再经固-液分离除去细胞碎片等固体杂质。 常用的固-液分离方法主要是：过滤和离心。 但是不同来源的培养液和发酵液其固-液分离速度差异很大，取决于该介质的理化性状，主要是细胞或菌体的大小和介质的黏度。 细胞絮凝技术是近年来发展很快的一种行之有效的方法。 发酵液中杂质很多，对后续分离影响最大的是高价无机离子(Ca2+,Mg2+,Fe3+)和杂蛋白等。 在预处理时，应尽量出去这些物质。 第二节 预处理的目的和方法 一、预处理的目的 ⑴改变发酵液的物理性质，促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离器的效率。 ⑵尽可能使产物转入便于后处理的某一相中(多数是液相)。 ⑶去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作。 二、预处理方法 1.加热法 此法的关键取决于产品的热稳定性。 是最简单廉价的预处理方法，加热可降低悬浮液的强度，加速聚集作用，去除某些蛋白质杂质，破坏凝胶状结构，增加滤饼孔隙度，使固液分离变容易。 2.调节悬浮液的pH值 这个方法也很简便。 全细胞的聚集作用取决于pH值的大小，恰当的pH能够促进聚集作用，一般用草酸或无机酸或碱来调节。 3.凝聚和絮凝 都是悬浮液预处理的重要方法。 都是将化学药剂预先投入悬浮液，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使它们聚集成可分离的絮凝体，再进行分离。 凝聚和絮凝都能有效增加颗粒尺寸，增大颗粒的沉降或浮选速率，提高滤饼的渗透性或在深层过滤时产生较好的颗粒保留作用。 深层过滤：颗粒尺寸比介质的孔道直径小得多，但孔道弯曲细长，颗粒进入之后很容易被截住，更由于流体流过时所引起的挤压和冲撞作用，颗粒紧附在孔道的壁面上，这种过滤是在介质内部进行的，介质表面无滤饼形成。 凝聚和絮凝 凝聚：在投加的化学物质(如：水解的凝聚剂，铝、铁的盐类或石灰等)作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成1mm大小的块状凝聚体的过程。 凝聚剂的作用：对粒子表面电荷的中和；消除双电荷层而脱稳；通过氢键或其他复杂的形式与粒子结合发生凝聚。 凝聚和絮凝 絮凝：使用絮凝剂(通常是天然或合成的大分子质量聚电解质)将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。 絮凝剂的作用：桥架作用。 絮凝剂相对凝聚剂而言更昂贵，其使用剂量必须正确使用并仔细优化。 最佳的絮凝剂使用剂量为：一般为大概一半的粒子表面被聚合物覆盖时所使用的絮凝剂剂量。 凝聚剂和絮凝剂的类型 凝聚剂：主要是无机类电解质，大多为阳离子型，分无机盐类、金属氢氧化物类和聚合无机盐类等。 絮凝剂：其官能团分为阴离子、阳离子和非离子三大类型。 4.去除杂蛋白质的其他方法 ⑴等电沉淀法 蛋白质在等电点时溶解度最小，能沉淀除去。 很多蛋白质的等电点在酸性范围内(pH为4.0-5.5)。有些蛋白质在等电点时仍有溶解度，可结合其他方法。 ⑵变性沉淀 蛋白质从有规则的排列变成不规则结构的过程称变性，变性蛋白质在水中的溶解度较小而产生沉淀。 方法：加热、大幅改变pH、加有机溶剂(丙酮、乙醇等)、加重金属离子(Ag+,Cu2+,Pb2+等)、加有机酸(三氯乙酸、水杨酸、苦味酸、鞣酸、过氯酸等)及表面活性剂。 ⑶吸附 吸附作用常能有效除去杂蛋白质。 在发酵液中加入一些反应剂，它们相互反应生成的沉淀物对蛋白质具吸附作用而使其凝固。 5.不溶性多糖的去除 不溶性多糖较多时，发酵液黏度增大，固液分离困难，采用酶将其转化为单糖以提高过滤速度。 如在蛋白酶发酵液中加入淀粉酶，能将培养基中多余的淀粉水解成单糖，降低发酵液黏度，提高滤速。 6.高价金属离子的去除 对成品质量影响较大的无机杂质主要有：Ca2+,Mg2+,Fe3+等高价金属离子，预处理中应将它们除去。 1、概念 细胞破碎是用物理、化学、酶或机械的方法来破坏细胞壁或细胞膜的方法。 细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术。 2、目的 破坏细胞外围，使细胞内容物释放出来。 3.原理 ⑴细胞的结构 细胞壁的破碎最关键。 动物细胞无细胞壁，易于破碎。 植物和微生物细胞的细胞壁坚固，破碎困难。 ①细菌 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖层组成，细胞壁厚，为15-50nm。