日本鳗鲡脾脏抗菌肽抗菌活性检测方法的比较-动物营养学报.PDF

动物营养学报２０１４，２６（１１）：３４６１⁃３４６８ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１４．１１．０３６ 日本鳗鲡脾脏抗菌肽抗菌活性检测方法的比较 １，２ １，２ １，２ 梁　 英 　 黄文树 　 关瑞章 （１．集美大学水产学院，厦门 ３６１０２１；２．集美大学鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心，厦门 ３６１０２１） 摘　 要： 本试验旨在建立一种在日本鳗鲡脾脏抗菌肽分离纯化过程中简便、灵敏的检测其抗菌 活性的方法。 试验以日本鳗鲡脾脏分子质量小于１０ ｋｕ 的蛋白质为抗菌肽样品，选择琼脂板孔 穴扩散法和微孔液体培养法２种传统方法及微量液体培养法为检测方法，比较这３ 种方法在抗 菌肽对３种鳗鲡常见致病菌株（迟钝爱德华菌、气单胞菌、嗜水气单胞菌）抗菌活性检测中的灵 敏度和优缺点。 结果表明：与琼脂板孔穴扩散法及微孔液体培养法相比，微量液体培养法简便、 易于观察结果，具有最高的灵敏度且样品用量最少，适合在鳗鲡脾脏抗菌肽分离纯化过程中跟 踪检测抗菌活性，尤其适合分离纯化后期获得微量单一样品抗菌活性的检测。 由此得出，微量 液体培养法适用于检测日本鳗鲡脾脏抗菌肽的抗菌活性。 关键词： 日本鳗鲡；脾脏；抗菌肽；抗菌活性 中图分类号：Ｑ５１６　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１４）１１⁃３４６１⁃０８ 　 　 抗菌肽是普遍存在于生物体内一类广谱抗微 踪目的的同时还可以初步验证单一抗菌活性组 生物的小分子多肽的总称，通常其分子质量小于 ［９］ 分 。 这些方法都有各自的优缺点，目前尚无统 １０ ｋｕ。 抗茵肽不仅具有广谱抗细菌的能力，对真 一的标准方法用于抗菌活性的检测，基于分离材 菌、病毒以及寄生虫等均有杀伤作用，是先天性免 料、方法和阶段的不同，关键是要选择一种简单易 － ［１ ３］ ［１０］ 疫防御系统的重要组成部分 。 抗菌肽的作用 行、灵敏度高的方法。 马瑜等 比较了两栖类皮 及应用效果是有目共睹的。 然而，大多数内源性 ［１１］ 肤抗菌肽抗菌活性检测技术。 邬晓勇等 建立了 抗菌肽在动物体内的含量极其微少，难以获得大 一种在蛙皮抗菌肽分离纯化过程中简单、快速、灵 ［４］ ［１２］ 量的样品 。 特别是在分离纯化的后期，获得的 敏的检测抗菌活性的方法。 齐珂珂等 建立了鸡 一些珍贵的单一蛋白质样品，其质量仅为微克级， 白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法。 李 ［１３］ 能用于检测抗菌活性的蛋白质的量则更少。 因 秀兰等 研究了家蚕抗菌肽琼脂糖孔穴扩散法与 此，建立微量而敏感的抑菌试验方法在内源性抗 比浊法测定抗菌活性的差异及其相关性。 在鱼类 菌肽的开发研究中极为重要。