葡萄糖调节蛋白75在a53t突变α突触核蛋白致帕金森病线粒体损伤中的作用及机制研究神经病学专业论文.docxVIP

复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 (p 〈0 .0 1 )。 同 时 ，高 表 达 A 5 3T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白后 ，主 要 定 位 于线 粒 体 的葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 的表 达 量 显 著 下 降 （p 0.0 1 )。A 5 3T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白可 以 降 低 线 粒 体 膜 电位 ，使 B a x/ B c l2 的 表 达 比值 显 著 升 高 ，但 并 未 增 加 细 胞 浆 中细 胞 色 素 C 的 释 放 。我 们 证 实 A 53T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白对 线 粒 体 融 合 / 分 裂 的 影 响 并 没 有 通 过 线 粒 体 动 力 学 相 关 蛋 白 Dr p l 和 M fn2 。 结 论 高 表 达 A 53T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白能损 伤 SH- SY 5Y 细 胞 ，该 损 伤 作 用 可 能 是 通 过 线 粒 体 损 伤 介 导 实 现 的 。 第 二 部 分 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 表 达 水 平 的调 控 及 相 应 细 胞 系 的 构 建 目的 调 控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 在 细 胞 内 的表 达 水 平 。 方 法 根 据 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 的基 因序 列 设 计 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 的 干 扰 序 列 。之 后 在 慢 病 毒 表 达 质 粒 上 加 入 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 序 列 和 干 扰 序 列 ， 利 用 慢 病 毒 包 装 系 统 ，成 功 包 装 并 浓 缩 获 得 高浓 度 慢 病 毒 颗 粒 。借 助 慢 病 毒 转 染 靶 细 胞 ， 经 分 离 纯 化 及 免 疫 印 迹 鉴 定 后 获 得 能 调 控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 表 达 量 的 稳 定 细 胞 系 。 结 果 我 们 成 功 设 计 了葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 的干 扰 序 列 ， 能 将 葡 萄 搪 调 节 蛋 白 75 的表 达 量 下 调 50% 以上 。之 后 成 功 包 装 并 浓 缩 了调 控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 的 慢 病 毒 颗 粒 ，葡 萄糖 调 节 蛋 白 75 高 表达 慢 病 毒 的滴 度 为 ：l X 107T u/m L ，葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 下 调 慢 病 毒 的滴 度 为 ：3 X 107T u/m L 。利 用 慢病 毒 我 们 分 离 获 得 了 能 高 表 达 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 和 下 调 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 表 达 的 细 胞 系 。 结 论 成 功 构 建 并 分 离 纯 化 了调 控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 表 达 的细 胞 系 。 第 三 部 分 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 对 A 53T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白 所 致 线 粒 体 障碍 的 影 响 目的 探 讨 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 对 A 53T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白所 致 线 粒 体 障 碍 的 影 响 及 可 能 机 制 。 方 法 在 高 表达 A 53T 突 变 a - 突触 核 蛋 白的 SH- SY 5Y 细 胞 中 调控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 表 达 ，分 别 获 得 稳 定 高 表 达 和 干 扰 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 表 达 的细 胞 系 。 在 此 基 础 上 ，检 测 线 粒 体 毒 物 鱼 藤 酮 诱 导 的 细 胞 活 力 变 化 ，探 讨 调 控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 表 达 对 A 53T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白所 致 多 巴胺 能 细 胞 鱼 藤 酮 高 敏 感 性 的 影 2 复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 响 。通 过 检 测 线 粒 体 膜 电位 、B ax /B c l2 表 达 量 比值 、 细 胞 浆 细 胞 色 素 C 释 放 量 等 反 映 调 控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 表 达 对 细 胞 线 粒 体 功 能 损 害 的 影 响 。通 过 检 测 线 粒 体 D rp l 和 M fn2 表 达 量 来 探 讨 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 75 对 A 53T 突 变 a - 突 触 核 蛋 白 所 致 线 粒 体 融 合 / 分 裂 的 影 响 及 可 能 作 用 机 制 。 结 果 在 高 表 达 A 5 3T 突 变 a -突 触 核 蛋 白的 SH- SY 5Y 细 胞 中 调 控 葡 萄 糖 调 节 蛋 白 7 5 表 达 后 ，细 胞