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结核病实验室涂片镜检技术 王 甦 民 北京结核病控制研究所 2010年12月 结核病基本情况： （1） 结核病是一个古老的疾病，至今仍然严重威胁着人类健康。 近十几年来，由于结核菌的耐药性、 HIV/TB双重感染 移民（流动人口）问题 使全球结核病控制工作面临严重挑战。 全球结核病告急 据世界卫生组织估计目前全球约有： 1/3人口（20亿）感染结核菌； 2000万结核病人； 每年有800万-1000万新发病例； 每年300万人死于结核病； 我国结核病现状 我国的结核病疫情依然十分严重，是世界上结核病患病率最高的22个国家之一。 是耐药结核病最多的全球27个国家之一。 每年新登记的结核病患者约130万。 我国结核病现状 2000年全国结核病流行病学抽样调 查初步结果显示： 全国受结核菌感染人口超过5.6亿； 全国现有传染性肺结核病人200万，传染性肺结核患病率为157.8/10万。 结核病死亡率为9.8/10万，在各种死亡原因中占第11位。 结核菌耐药率：27.8%，初始耐药率18.6%，获得性耐药率：46.5%。INH:17.6%，SM：17.3%，RFP：16.6%，EMB：1.5%，MDR：10.7%。 非结核分枝杆菌感染：11% 我国结核病现状  —我国历次流调疫情 结核病细菌学检查的重要作用 是结核病临床诊断和治疗的重要依据 是直接发现病原菌的诊断方法，比影象学、免疫学等检查具有更高的特异性 是确定、调整化疗方案的重要依据 是国家结核病控制规划（NTP）的重要组成部分 是发现传染源的最主要途径和手段 是考核疗效、评价防治效果的可靠指标 概 述 结核分枝杆菌是1882年郭霍（Robert Koch）从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。 分类 结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌科的分枝杆菌属，分枝杆菌属种类甚多，目前已命名的有200多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。 概 述 分枝杆菌呈分支状生长， 营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。 经石炭酸复红染液着色后，不被盐酸酒精脱色，故称此类细菌为抗酸菌。 分枝杆菌分类 结核分枝杆菌结构 结核分枝杆菌组成： 细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质 细 胞 壁 厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。 含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。 功能： 保护细菌的固有形态 抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和 杀伤 如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为L型细菌。 细 胞 膜 细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。 主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。 功能： 细菌与外界环境进行物质交换 在细胞内一系列代谢活动中起重要作用 菌 体 成 分 脂类 多糖 蛋白质 核酸 盐类 脂 类（1） 结核菌体脂类含量比其他细菌高，占细胞壁干重的60％，是引起结核病特征性变化与表现的物质基础。 脂质含量与细菌毒力相关，毒力强的Mtb含脂最高。 脂质只要有磷脂、脂肪酸、蜡质等成分，多与蛋白质、多糖以结合形式存在。 脂 类（2） 磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机体致敏作用。 索状因子：与Mtb毒力密切相关。 硫脂 蜡质：占脂质总量48％，分A、B、C、D。 结核菌酸：促进机体形成结核结节。 分支菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌的抗酸性有关。 多 糖 由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等组成。 多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式存在。 是免疫反应的重要抗原物质。 蛋 白 质 Mtb含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及活菌在分泌过程中分泌于细胞外的多种蛋白组成。 结核菌的主要抗原性物质。 结核菌素、PPD为多种蛋白的复合抗原，可刺激机体免疫应答。 核 酸 RNA含量比DNA高4－5倍。 RNA分布于细胞质内，DNA存在于细胞核物质中。 DNA是遗传物质，将遗传信息传给子代，并指导RNA的合成。 RNA是蛋白质和其他细胞成分合成必须的物质。 结核分枝杆菌基因组 结核分枝杆菌DNA中约含4000个基因组。 结核分枝杆菌为2.5×109道尔顿, 卡介苗株为2.8×109道尔顿 结核分枝杆菌H37Rv基因组全序列共含4.4×106碱基对，平均鸟嘌呤+胞嘧啶含量（G＋C）为65.6％。 盐 类 钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分的 6％。  营养与发育 结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环境下也能生存，