流式细胞仪原理及应用.ppt

致： 流式细胞术的基本概念 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且能够同时检测快速直线流动状态中的单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 流式细胞仪的检测范围 细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 …… 细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内/外的细胞因子 激素结合位点、细胞受体 蛋白磷酸化 pH值 钙离子浓度 细胞膜电位、线粒体膜电位 …… 流式细胞仪的原理 散射光信号 散射光信号 外周全血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后） 流式细胞仪的检测信号 荧光信号 使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析 荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量 荧光信号 数据存储 数据显示 直方图（Histogram） 二维点图（Dot Plot） 等高线图（Contour Plot） 密度图（Density） 三维图（3D Plot）等 单参数直方图分析 数据分析 多参数散点图分析 数据分析 等高图和密度图分析 数据分析 三维图分析 流式细胞仪的应用 流式细胞仪的临床应用 流式细胞仪的科研应用 免疫功能研究 血小板分析（心脑血管疾病） 细胞周期和倍体分析 细胞凋亡 干细胞研究 树突细胞研究 肿瘤相关基因表达的研究 抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究 放疗/化疗疗效的研究 淋巴细胞亚群分析 使用经荧光素标记的特异单克隆抗体，进行多色染色，同时分析淋巴细胞膜上多种白细胞分化抗原（CD分子）的表达，可以将淋巴细胞亚群区分开，进行定性分析 各淋巴细胞亚群的百分含量 淋巴细胞亚群的绝对计数，进行定量分析 淋巴细胞亚群分析 根据功能，淋巴细胞主要分为 B淋巴细胞（CD19+），与体液免疫有关 T淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关 总T和总B可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病 NK细胞（CD3-CD16+56+），行使免疫监控功能，? 能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用。 淋巴细胞亚群分析 根据CD4、CD8表达，T淋巴细胞又分为 T辅助/诱导细胞（CD3+CD4+） T抑制/细胞毒性细胞（CD3+CD8+） Th/Ts 评价那些自身免疫失调、被怀疑是免疫失调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态 临床意义——判断病人的机体免疫状态 诊断原发性免疫缺陷病（如先天性无 r 球蛋白血症）或继发性免疫缺陷病（如AIDS） 造血干细胞移植后免疫重建（6个月NK?；9个月T、B?） Th/Ts?：机体免疫功能亢进：自身免疫性疾病，如SLE、类风湿性关节炎等（治疗有效恢复正常） Th/Ts?：机体免疫功能低下：AIDS、病毒感染、慢性活动性肝炎和活动性肝硬化、再障、结核、肿瘤等 移植后动态免疫监测： 急排临床症状出现前1-5天，活化T和Th/Ts持续?，1.2预示急排； Th/Ts持续?表明可能感染，比值1.08，可能性大，0.2应停用免疫抑制剂； 实体肿瘤疗效和病人免疫状态观察 治疗前常伴T? 、Th/Ts?，放/化疗有效可恢复； 淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常较好； 探索疾病发病机理、进程和预后（炎症、肿瘤） 常见疾病的T 淋巴细胞的变化： ` CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ 类风湿性关节炎 ? （活动期） ? ? 系统性红斑狼疮 - 或? （活动期） ? ? ? 多发性硬化症 ? 重症肌无力 ? ? 膜型肾小球肾炎 ? ? 胰岛素依赖性糖尿病 ? ? 乙型肝炎 ? 自身溶血性贫血