实例2型糖尿病相关基因定位研究.doc

论文实例：2型糖尿病相关基因定位研究 作者简介：骆天红，男，1968年05月出生，1998年 09月师从于上海第二医科大学罗敏教授，于XX年06月获 博士学位。摘要 2型糖尿病的发病机制至今仍不甚明了，但流行病学研 究显示其重要的遗传背景，且其遗传方式符合多基因病遗 传模式，即有多个基因参与了 2型糖尿病的发生和发展， 正因为其遗传方式不符合经典的孟德尔遗传规律，因而给 2型糖尿病相关基因的研究带来了很大的困难。随着人 类基因组计划实施和现代遗传学技术发展，一大批DNA遗 传标志在染色体上得到精确定位以及快速高效的连锁分析 软件的出现，使人们有可能通过一种全新的策略一基于基 因组扫描的定位克隆方法来研究2型糖尿病的相关基因。 至今为止，仍无中国人及亚洲人群2型糖尿病基因组 扫描的报道，本文首次在国际上报道了中国汉族人2型糖 尿病易感基因位点。 通过收集大量2型糖尿病患病同胞对家系，利用人类 多态性研究中心公布的微卫星位点，对这些家系进行全基 因组扫描和连锁分析，以期找出2型糖尿病相关基因所在 的染色体区域。找出D9S 175位点附近候选基因在中国人群 中的单核背酸多态性，并探讨其与2型糖尿病的关系。 对102个华东地区汉族人2型糖尿病家系，其中包括 糖尿病患者282人，74个家系有2个糖尿病同胞，18个家 系有3个糖尿病同胞，10个家系有4个糖尿病同胞，利用 Perkin-Elm er生物技术部提供的荧光标记的微卫星位点引 物成套试剂盒，共2 47微卫星位点，进行全基因组扫描， 并分别利用非参数分析及参数分析软件GENEHU NTER和 MLINK进行连锁分析，找出染色体上与2型糖尿病连锁的位 点及区域。对D 9S175位点附近的部分候选基因的5,上游 的调控序列、外显子以及与外显子紧邻的内含子区域的序 列用双向测序法进行检测，筛查主要通过Poly Ph red软件 进行，并通过2型糖尿病患者的样品池与正常对照人群D NA样品池的位点的峰咼比初步估计该位点等位基因在两组 人群中的分布频率。 全基因组扫描结果显示9号染色体上D9S171和D9S175 同2型糖尿病有连锁倾向，其非参数分析统计量Zal 1- score分别为和，其相应的P值分别为X 10—4和X10 —4, 参数分析结果也显示类似的结果，其L od-score分别为和, P值分别为1 0-5和7 10-5o此外，对2型糖尿病按体 重指数进行分组后发现，低体重指数组在2 0号染色体上 D20S 196位点同2型糖尿病有较强连锁倾向，其L-score从 上升至，而P值则从下降到X10-4o另外基因组中尚有多 个位点及染色体区域显示同2型糖尿病呈较弱的连锁倾向。 其中9号染色体上的D9S171和D 9S175两个位点及其 附近的区域可能存在2型糖尿病易感基因，根据GENETHON 公布的人类遗传学图谱，这两个位点分别距9号染色体短 臂末端42 cM及。最近，在其它人群中，也发现这两个位点 附近的区域同2型糖尿病或其相关指标连锁。这些结果提 示9号染色体上可能存在着不同种族及人群共有的2型糖 尿病易感基因。从候选基因角度看，9q 13-21区域中也存 在着一些重要的候选基因，如X25基因，该基因编码一名 为fra tax in的线粒体蛋白，这种蛋白表达量减少可引起一 种少见的遗传性疾病 Frei driech共济失调，这种疾病 的患者常伴有糖代谢紊乱，研究发现X25基因的第一个内 含子GAA重复序列的纯合扩增可引起这种疾病，正常人X25 基因的第一个内含子GA A重复序列可有9次以下的重复， 而Frei driech共济失调患者重复次数可达到1 00至200 次甚至更多。该重复序列中等程度的扩增（10?40次）可引 起糖代谢紊乱而又不至于引起共济失调，因而同2型糖尿 病呈显著相关。但X25基因是否是中国汉族人2型糖尿病易 感基因，还有待于进一步验证。 另一个值得一提的发现是2号染色体长臂近末端处 D2S126显示同2型糖尿病连锁可能（P值为）。事实上，在 D2S126附近还有两个重要的候选基因，一个是NEUR 0D1, 该基因编码的蛋白同HLH蛋白E4 7形成异二聚体后，可同 胰岛素基因启动子上的E-box序列结合，从而调控胰岛素 的分泌，Malecki等人发现，该基因的杂合突变同2型糖尿 病相关；另一个重要的候选基因为胰岛素受体底物1基因, 该基因编码的蛋白质在胰岛素信号转导过程中起重要作用, 研究发现，该基因的某些特殊等位基因同2型糖尿病相关, 因此，2号染色体长臂近末端处可能是引起2型糖尿病易感 性的一个重要区域。 由于2型糖尿病是一种异质性较强的复杂性状疾病， 同样是迟发型2型糖尿病患者，其易感基因在不同家系中 可能有所不同，因而将由不同易感基因引起的糖尿病的家