玫瑰组织培养及再生方法研究.doc

玫瑰组织培养及再生方法研究 摘要：玫瑰组培苗已投入大规模生产中，已取得显著经济效益。本文对玫瑰的组织培养进行了较为全面的综述。目前，玫瑰采用根、茎、叶片、叶柄、茎尖、原生质体、合子胚、花药、花萼、花托、腋芽进行组织培养取得成功；主要采用MS培养基，添加低浓度的激素BAP03～05mg/L，NAA0004～03mg/L或NAA或GA005～20mg/L诱导不定芽；在MS培养基中添加更低浓度的BAP和NAA进行壮苗；多采用低盐成份的MS培养基添加低浓度的NAA进行生根培养。 关键词：玫瑰 ，玫瑰组织培养的意义，方法 玫瑰（rose）是蔷薇科、蔷薇属直立灌木，是世界上重要的观赏花卉之一，亦是提制香精用于各类高级食品、化妆品的重要原料。常见的有紫玫瑰、红玫瑰、白玫瑰和杂交玫瑰等品种；果实呈球形、卵形或长圆形，红色，萼片宿存。花期5～9月，果期9～10月[9]。玫瑰色、香俱佳，形似皎洁美玉，且浓香诱人，素有花中皇后之称。自古以来玫瑰花就经常作点缀园林，或腌酱、泡露、窨茶、酿酒、入药等加工应用；更有以玫瑰花作妇女装饰、美容和香化用品[6]。玫瑰有效成分的提取起源于古代，最初是为了获得草药医治各种疾病，原始的做法是用水浸渍鲜花，以提取其中的有用成分。 中国是栽培与应用玫瑰花最早的国家之一。玫瑰的繁殖方式很多，常以扦插或嫁接繁殖，但是繁殖率低且病毒感染严重，产量和品质的提高受到很大限制，难以满足规模化生产的需要，但是，研究者们利用组织培养技术为玫瑰的繁殖和新品种的选育提供了新的途径，可以满足规模化生产的需要[4]。 一、玫瑰组织培养的意义 （1） 快速繁殖 玫瑰有性生殖能力差，大多观赏价值高的品种不形成种子，种子繁殖不现实。而玫瑰实生苗观赏价值较差，因此生产上必须通过野蔷薇扦插再嫁接进行繁殖。这样耗时、耗人力、耗财力，成本高，大规模生产困难。利用组织培养技术可以实现玫瑰优良品种的快速繁殖［3］，并且能保持原有的优良性状不变。玫瑰组培增殖系数为４～５，半年至一年内能获得上百万种苗。 （2 ）获得无病毒植株 玫瑰在生长过程中，能感染一种或数种病毒或类病毒。长期营养繁殖，如扦插、嫁接、分株，不仅不能脱毒，反而使病毒积累，严重影响玫瑰的品质，导致玫瑰观赏价值下降，比如花径变小、色泽变淡、产花减少、斑点较多、花形不规则、易感染病虫等。通过组织培养技术，利用玫瑰茎尖脱毒后，使玫瑰的种性得到复壮，生长势增强，花径增大，色泽鲜艳，抗病能力提高，产花量上升［4］。 （3 ）培育新品种 在组织培养过程中往往会发生芽变，芽变的结果导致花色变异、花的大小变异、花期变异、叶色变异、染色体数量变异等。在组织培养过程中，一旦发生芽变，准确切取变异芽，并将其繁殖成完整植株，可产生有特殊观赏价值的新品种。 （4 ）种质资源的保存 玫瑰种质资源丰富，按传统方法保存种质资源占地面积大，且资源易受人为因素和环境因素的破坏而丢失。用组培方法，用极小的空间就可长期有效地保存玫瑰的种质资源［3］ 二、 玫瑰组织培养的方法属于植物组织培养方法 包括培养基的配制、灭菌、接种、培养、驯化移栽等步骤。但在一些过程中也有一些特殊性： （一）玫瑰的组织培养常用MS培养基、木本植物培养基或B5培养基。培养基中的植物生长调节剂则可根据植物组织的状况调节其用量。如BA 1.0~10mg/L、IAA 0.1~1.0mg/L、GA30.1~20mg/L、NAA0.1~2.5mg/L等。培养基的灭菌一般采取在121温度下高压20~25min。对培养基中所需的维生素等高温下易分解的成分，则用直径为0.2微米的孔状滤膜灭菌。[2] （二）对于外植体选取。一般而言，在材料休眠末期或萌动前期选取外植体较为有利。从生长在田间或盆栽的优良品种植株上，选取生长健壮、无病虫害的当年生枝条的茎尖和幼茎。取材最好在晴天正午，并且取用植株上部的幼茎。阴雨天或靠近地面的幼茎，表面污染较为严重，难于消毒。在取材前两三～周，最好将母株置于温室内培养，不要给它喷水。玫瑰除用茎尖和幼茎做外植体外，也可以用叶片、叶柄、根、茎、原生质体、胚、花药、子房、花萼和花托做外植体[1]。 然后消毒灭菌，取玫瑰外植体，用5%～10%的次氯酸钠浸泡10～30min或用01%～02%的HgCl浸泡5～15min。用无菌水清洗7～10次后接种。也可先用75%的酒精浸泡20～30s再采用上述方法消毒。消毒灭菌完毕后，将幼茎切割成05～10cm长的至少带有一个节的切段，接种于培养基中[2]。升汞处理的时间长短对玫瑰茎尖和灭菌效果有较大影响，处理时间过长易使外植褐化甚至死亡，过短影响灭菌效果且污染率高。实验表明以升汞处理5分钟效果最好，灭菌成活率可达80%[4]。 （三）愈伤组织的诱导。将外植体接种于MS+BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖10000m