癌相关成纤维细胞促进唾液腺腺样囊性癌侵袭及其机制研究口腔基础医学专业论文.docxVIP

大连医科大学硕士学位论文目 大连医科大学硕士学位论文 目 录 一、摘要 ．1 (一)中文摘要 ．1 (二)英文摘要 ．3 二、正文 ．5 (一)一HU言(一) 舌 ．．5．5 (二)材料和方法 ．8 1．材料 8 1．1 HE、免疫组织化学染色实验仪器 ．8 1．2细胞培养仪器 9 1．3 微流控芯片制作仪器 9 1．4组织来源 ．．9 1．5细胞来源 ．．9 1．6 HE染色、免疫组织化学染色及细胞免疫荧光染色主要材 ；阻． ． ． ． ． ． ． ． ． ．9 1．7细胞提取培养，细胞迁移和侵袭实验主要材料 ．10 1．8微流控芯片制作材料 ．．10 2．方法 1 1 2．1 HE染色方法 1 1 2．2免疫组织化学染色方法 ．．11 2．3细胞免疫荧光染色方法 ．．12 万方数据 2．4原代细胞提取方法 2．4原代细胞提取方法 ．．13 2．5 CAF条件培养液的收集 ．14 2．6细胞划痕实验方法 ．．14 2．7 Transwell小室细胞迁移实验方法 ．15 2．8 Transwell小室细胞侵袭实验方法 ．15 2．9微流控芯片制作．传统光刻胶方法 ．16 2．10微流控芯片中的考查细胞侵袭能力的方法 ．．16 2．11微流控芯片中肿瘤细胞和成纤维细胞共培养的实验方法．17 3．统计学分析 l 7 (三)结果 ．17 1．CAF表达活化成纤维细胞的典型生物学标志物 1 7 2．CAF具有较强的迁移和侵袭能力 ．19 2．1 基于传统方法的CAF迁移和侵袭能力的考查 ．19 2．2基于微流控芯片的CAF侵袭能力的考察 ．20 3．CAF．CM促进ACC细胞的迁移和侵袭 22 4．CAF引导ACC细胞的侵袭 23 5．CAF促进ACC细胞侵袭的抑制实验 25 (四)讨论 27 (五)结论 29 (六)参考文献 ．．30 三、综述 ．．36 (一)综述 36 万方数据 大连医科大学硕士学位论文(二)参考文献 大连医科大学硕士学位论文 (二)参考文献 ．．44 四、附录 52 五、攻读学位期间发表文章情况 ．．53 六、致谢 54 7 万方数据 大连医科大学硕士学位论文癌相关成纤维细胞促进唾液腺腺样囊性癌侵袭及其机制研究 大连医科大学硕士学位论文 癌相关成纤维细胞促进唾液腺腺样囊性癌侵袭及其机制研究 硕士生姓名：李娇 指导教师：刘婷姣教授 专业名称：口腔基础医学 中文摘要 目的：唾液腺腺样囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma，ACC)侵 袭性强，易发生远处转移。本研究的目的为探究体外条件下ACC来源的癌相关成 纤维细胞(cancer associated fibroblasts，CAF)的生物学特性，及其对ACC细胞 侵袭的影响。 方法：本研究通过HE染色方法，对两例ACC组织进行病理诊断；免疫组织 化学染色的方法检测ACC组织间质中Q．平滑肌肌动蛋白(Ⅱ．Smooth muscle actin， 0【．SMA)的表达情况。对这两个新鲜ACC组织中提取的原代细胞进行培养和纯化， 并通过细胞免疫荧光染色的方法检测原代细胞中广谱细胞角蛋白(pan．cytokeratin， CK)、波形蛋白(vimentin，VIM)、q．SMA、成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activated protein，FAP)、成纤维特异性蛋白l(fibroblast specific protein l，FSP．1)的表达 情况。细胞划痕实验考察CAF细胞的迁移能力。Transwell小室细胞侵袭实验模型 和微流控芯片模型考察CAF的侵袭能力。收集CAF的条件培养液(conditional medium，CM)，通过细胞划痕实验和Transwell小室细胞侵袭实验考察CAF对ACC 细胞迁移和侵袭能力的影响。通过微流控芯片模型，研究ACC细胞与CAF侵袭 时的相互作用关系。通过抑制基质金属蛋白酶和干扰CXCLl2／CXCR4信号通路来 考查CAF对ACC侵袭的抑制作用。 结果：观察HE染色切片，两例病例组织均为ACC，免疫组织化学染色结果 表明0【．SMA在ACC组织的间质中表达阳性。细胞免疫荧光染色方法鉴定从ACC 万方数据 大连医科大学硕士学位论文组织中提取的原代CAF，结果显示这些细胞CK表达阴性，VIM表达阳性，几乎 大连医科大学硕士学位论文 组织中提取的原代CAF，结果显示这些细胞CK表达阴性，VIM表达阳性，几乎 所有的细胞都表达FAP和FSP．1，大部分细胞表达c【．SMA，提示我们提取这些原 代细胞表达典型的CAF生物学标记物。传统的细胞划痕实验、Transwell小室细胞 迁移实验以及Transwell小室细胞侵袭实验均显示CAF与正常牙龈成纤维细胞相比， 其迁移