镉致大鼠肝细胞毒性机理研究临床兽医学专业论文.docxVIP

2 2 扬州人学博十学位论文 明显差异(胗O．05)：细胞凋亡率升高，细胞内ROS水平增加和AqJm降低，部 分剂量组与对照组差异显著或极显著(氏O．05或P0．01)；表明镉可致肝细胞产 生氧化应激，且通过线粒体途径引起细胞凋亡。 3．N．乙酰半胱氨酸对镉致肝细胞损伤的影响 对肝细胞染毒的同时添加NAC，通过测定肝细胞的存活率、细胞形态和凋亡、 △甲m和ROS的变化，观察NAC对镉致大鼠肝细胞损伤的保护作用。 结果表明，NAC可显著或极显著提高镉处理细胞存活率(氏0．05或P0．01)， 呈剂量．效应关系，NAC可使镉处理组皱缩和坏死细胞、凋亡细胞明显减少，显著 或极显著降低镉处理细胞ROS生成和阻止△Tm的降低(P0．05或P0．01)。表明 NAC可有效保护镉致大鼠肝细胞的毒性损伤。 4．镉致大鼠肝细胞凋亡的非easpase途径 用醋酸镉处理肝细胞，观察caspase．3含量变化以及caspases广谱抑制剂 Z．VAD．fmk对镉致细胞存活率、形态和凋亡变化的影响。 结果表明，镉暴露的不同时间，肝细胞caspase．3活性无明显变化，与对照组 差异不显著(尸0．05)；Z．VAD．fmk对镉所致的细胞存活率、细胞形态和细胞凋 亡无显著影响。表明caspase途径未参与镉致大鼠肝细胞的凋亡过程。 5．钙离子超载在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用 通过不同浓度醋酸镉处理肝细胞，不同时间点测定细胞内钙离子浓度，以及 钙离子抑制剂Bapta-AM对镉致细胞内钙离子浓度、细胞存活率、细胞形态、细胞 凋亡、细胞内ROS和AqJm变化的影响。 结果表明，镉暴露1．5 h时细胞内钙离子水平极显著升高(P0．01)，但随着 时间的延长，细胞内钙离子水平迅速下降，并接近对照组水平。而Bapta-AM可以 显著降低镉引起的钙离子水平升高，并显著提高镉处理细胞的存活率(P0．05)。 另外Bapta．AM可使镉处理细胞形态趋于完整、并使变形细胞和凋亡细胞减少，显 著或极显著减少ROS产生和抑制AqJm降低(P0．05或P0．01)。说明镉可致肝 细胞内钙离子水平升高，钙离子抑制剂Bapta．AM能有效降低细胞内钙离子水平及 细胞损伤，提示钙离子超载在镉致肝细胞凋亡中发挥重要作用。 6．镉致大鼠肝细胞凋亡的MAPK途径 汗纪仓：镉致人鼠肝细胞毒性机理研究在10“mol／L醋酸镉处理肝细胞的同时，用p38抑粝USB202190、JNK抑制剂 汗纪仓：镉致人鼠肝细胞毒性机理研究 在10“mol／L醋酸镉处理肝细胞的同时，用p38抑粝USB202190、JNK抑制剂 SP600125、ERK抑制剂U0126单独或联合作用于肝细胞，测定细胞存活率、细胞形 态、细胞凋亡率、△甲m和磷酸化p38蛋白表达的变化。 结果表明，SB202190可以显著或极显著提高镉处理组细胞的存活率，减少变 形细胞和凋亡细胞数量(尸o．05或P0．01)，但SP600125和U0126作用相反。 镉可极显著提高肝细胞磷酸化p38的表达量(尸0．01)，而SB202190能极显著降 低其表达(PO．01)；SB202190还可极显著升高镉引起的Aq-m降低(尸0．01)。 说明镉暴露使肝细胞产生的ROS引起p38 MAPK途径激活，并通过损伤线粒体引 起细胞凋亡。 关键词：镉；大鼠肝细胞；凋亡；氧化应激；钙离子；活性氧；p38 MAPK 一4 一4 扬州人学博十学位论文 The mechanism of cadmium—induced cytotoxicity in rat hepatocytes AB STRACT Cadmium(Cd)，an extremely important environment pollutant，was widely used in many industries．In human and other mammals，Cd affects adversely a number of organs and tissues，including the liver，kidney，lung，pancreas，testis，placenta and bone． Cd induced injury is very complex and unclear in the body．Cd induced cellular oxidative stress or apoptosis／deat