仿刺参中抗菌肽的分离纯化及抗菌和肮肿瘤活性研究细胞生物学专业论文.docxVIP

辽’刊币范大学硕十学何论文}商 辽’刊币范大学硕十学何论文 }商 要 仿刺参(Apostichopus Japonicus)是一种重要的海洋物种，主要分布在太平洋的东西 两岸及印度洋中。海参商业品种的育苗工作开始于20世纪80年代，日本、中国、印度 等国家先后取得成功。由于其含有丰富的黏多糖和蛋白质等，且具有营养价值和药用价 值高等特点，因此在山东和辽宁等地很快成为一种重要的养殖品种。 本研究采用甲醇浸提和凝胶过滤层析的方法，以仿刺参肠道为材料来提取抗菌肽， 并采用滤纸片扩散法和MTT法测定其体外抗菌活性及体外抗肿瘤活性。其中，抗菌活 性实验对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、枯草杆菌、溶壁微球 菌、迟钝爱德华菌、鳗弧菌8种常见菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration， MIC)进行了测试。另外，通过SDS—PAGE和高效液相色谱(HPLC)的方法对仿刺参 抗菌肽的组成进行了进一步的分析。 对仿刺参抗菌肽粗提物进行凝胶过滤层析分离后，得到了3个不同的组分，分别命 名为A1、A2、A3，活性实验发现仿刺参抗菌肽A3具有显著地抑菌活性和抑肿瘤活性。 MIC结果显示，仿刺参抗菌肽A3对溶壁微球菌、副溶血弧菌、大肠杆菌、金黄色葡萄 球菌、哈维氏弧菌、迟钝爱德华菌、鳗弧菌、枯草杆菌的最小抑菌浓度分别为0．5mg／ml、 1．0mg／ml、1．0mg／ml、1．0mg／ml、2．0mg／ml、2．0mg／ml、2．0mg／ml、4．0mg／ml。l—j 时发现仿刺参抗菌肽A3对肺癌A549细胞的增殖具有一定的抑制效果。SDS—PAGE电 泳显示仿刺参抗菌肽A3的分子量为6．5kD左右，HPLC结果可以看出仿刺参抗菌肽A3 有四个不同的组分构成。 本实验对仿刺参抗菌肽的功能进行了研究，发现了仿刺参抗菌肽A3对革兰氏阳性 菌和革兰氏阴性菌具有明显的抗菌活性，对肺癌A549细胞增殖的抑制作用呈明显的剂 量依赖关系。这一研究可能对抗菌及抗肿瘤新药的研发具有一定的意义，近年来，抗生 素被人们大量使用，由此带来了细菌耐药性问题，为了解决这一问题，我们可以考虑使 用仿刺参抗菌肽来取代抗生素。海参养殖业近年来快速发展，但是快速发展和管理落后 使各种病害问题也日益严重，因此我们从海参肠道内提取到抗菌肽，可以将其应用于水 产养殖中，以应对各种病害。 关键词：仿刺参；抗菌肽；抗菌活性；SDS—PAGE；最dql：P菌浓度(M I C) 仿刺参中抗菌肽的分离纯化及抗菌和抗肿瘤活性研究Isolation 仿刺参中抗菌肽的分离纯化及抗菌和抗肿瘤活性研究 Isolation and Purification of the Peptides from Apostichopus Japonicus and Evaluation of its Antibacterial and Antitumor Activities Abstract The Apostichopus Japonicus is an economically important marine species found in the Pacific and Indian Ocean．Since 1 980、S，seed rearing techniques of several commercial species have been successively established in Japan，China and India．Sea cucumbers possess high nutritional and medical value as they are abundant in mucop01ysaccha“de and proteins．Because of this reason，they are rapidly became a favored aquaculture species in Shandong and Liaoning Provinces． In the present article，peptides were isolated and purified from enteron of the Apostichopus japonicus by methanol and gel filtration chromatography．The antibacterial activities test and antitumor activities in vitro was carried out by the disk diffusion method and MTT assay．The minimal