多年生黑麦草再生体系的建立及农杆菌介导avp1基因的导入草业科学专业论文.docxVIP

甘肃农业大学2008届硕士毕业论文摘 甘肃农业大学2008届硕士毕业论文 摘 要 多年生黑麦草(Lolium perenne L．)是国内外广泛应用的重要冷季型禾草之 一。利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。本研究以多年生黑麦 草(Loliumperenne L．)的三个品种：里加(Regal)、贝尔勒(Belle)、马拉松(Marathon) 为研究对象，建立了高效的遗传转化体系，研究结果表明： (1)建立了多年生黑麦草的再生体系。以多年生黑麦草的芽尖、根尖、下胚 轴、成熟种子为外植体进行了愈伤组织诱导和分化的研究，通过不同处理结果的 比较表明，不同划割处理的成熟种子的愈伤组织诱导率不同，不同外植体的愈伤 组织诱导率也不同，芽尖、根尖愈伤组织的诱导效果较差，纵向划割的成熟种子 的愈伤组织的诱导率及分化能力均优于下胚轴；2,4．D浓度在5．7 mg／L，6-BA浓 度为0．05．0．1 mg／L时有利于成熟种子和下胚轴诱导产生愈伤组织；在分化培养 基中添加0．5．1．0mg／L6．BA对愈伤组织的分化效果较好；继代培养时间对愈伤组 织的分化率有很大影响，成熟种子和下胚轴在继代培养基上继代培养60d和80d 时分化率最高，继代天数过长不利于愈伤组织的生长。 (2)农杆菌介导的多年生黑麦草遗传转化体系的建立与优化。通过对实验现 象的观察和数据的统计分析表明，将预培养4d的黑麦草的胚性愈伤组织经ODeoo =0．6左右的农杆菌菌液在负压下浸染6min，共培养3d，用250mg／L的羧苄青 霉素(Carb)来脱菌，附加150I_tmol／L的乙酰丁香酮(AS)，然后转接到含75mg／L 的潮霉素的筛选培养基上进行筛选培养的转化体系效果最佳。 (3)目的基因AVPl的转化及对转基因植株的初步鉴定。将所得抗性愈伤组织 转接到含250mg／L的羧苄青霉素和75mg／L的潮霉素的分化培养基上进行诱导分 化，然后在1／2MS的生根培养基上使其再生成苗。最后，对转基因植株进行AVPl 基因中间片段及全长的PCR检测，结果显示黑麦草三个品种均没有获得转基因 植株。表明目的基因没有整合到多年生黑麦草基因组中。 关键词：多年生黑麦草，再生体系，AVPl基因，农杆菌，遗传转化 甘肃农业大学2008届硕士毕业论文Summary 甘肃农业大学2008届硕士毕业论文 Summary Perennial rye伊ass犯olium perenne三．)is one of the major cool·season turfgrass widely utilized both at home and abroad．For a long time，biotechnology has been widely applied to improve its characteristics．we choose three varieties for this reserch，which are Regal，Belle and Marathon．And we’ve established an efficient genetic transformation system．The results were as follows： (1)Establishment of hi．gll fiequency regeneration system of perennial 巧egrass．Different explants of Perennial巧egrass(Lolium perenne)were used for callus induction and differentiation on MS basic medium supplemented witll different concentration of 2,4一D and 6-BA．The results showed that different explants have different induction and differentiation efficiency．Shoot tip and root tip were ineffective in callus induction．111e callus induction and differentiation derived from mature seeds were superior to hypocotyl．When supplemented、析t11 5-7mg／L of 2,4一D and O．05-0．1 mg／L of 6一BA were propitious to callus induction‰mature see