肝脏特异性基因在文昌鱼中的鉴定及表达肝脏和急相反应起源探索动物学专业论文.docxVIP

㈣中国海洋大学博士学位论文 ㈣ 中国海洋大学博士学位论文 肝脏特异性基因在文昌鱼中的鉴定及表达：肝脏 和急相反应起源探索 Identification and expression of liver--specific genes in amphioxus：origin of the liver and acute phase response 学位论文完成日期 指导教师签字 答辩委员会成员签字 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 (逵!垫遗查基丝重要犍趔重明的：奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位做作者虢功 娶 签字日期：加，1年j月和日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构(如中国科学技术信息研究所等)送交论文的复印件和磁 盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 虢训导 ．导师签字： 签字日期：沙y，年s月；口日 签字日期： 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编 L 肝脏特异性基因在文昌鱼中的鉴定及表达：肝脏和急相反应 肝脏特异性基因在文昌鱼中的鉴定及表达：肝脏和急相反应 起源探索 摘要 肝脏是脊椎动物所特有的器官，有食物消化、血浆蛋白合成、激素生成和解 毒等功能。肝脏还是参与急相反应(APR)的主要器官。肝脏的起源一直以来都 是未解之谜；另外，脊椎动物样急相反应在动物演化中究竟启始于何时，也不清 楚。文昌鱼是最接近于脊椎动物的原始脊索动物之一，是研究脊椎动物进化和起 源的重要模式生物，文昌鱼的肝盲囊被认为是脊椎动物肝脏的同源器官。本文以 斑马鱼129条肝脏特异性基因为模板，在文昌鱼中鉴定得到了58条同源基因， 这些基因编码多种与生理生化功能相关的活性蛋白，如合成和代谢相关酶类、血 液组分、转录因子和载体蛋白等。随后，应用实时定量PCR技术研究了这58条 肝脏／肝盲囊特异性基因的表达情况，发现在LPS诱导的急相反应中共有52条同 源基因具有相似的表达模式。肝细胞核因子(Hl师)是调节脊椎动物肝脏特异性 基因表达的重要转录因子，如HNF．4、CAAT区／增强子结合蛋白(C／EBP)和信 号转导与转录激活因子(STATs)都是脊椎动物肝细胞急相反应的重要调控因子。 接下来，我们搜索比对HNF(HNF．1、HNF．3、HNF一4和HNF．6)和APR相关 (HNF．4、C／EBP和STATs)转录因子在肝脏／肝盲囊同源基因启动子区的结合位 点，发现在文昌鱼和斑马鱼中存在着相似的HNF和APR相关的转录调控网络， 调控这些肝盲囊／肝脏特异性基因或急相反应相关基因的转录表达。由此可见， 文昌鱼和斑马鱼共有大量的肝盲囊／肝脏特异性表达基因，其中的大部分基因在 LPS诱导的急相反应中也具有相似的表达模式，并且在这些同源基因中还存在着 相似的HNF与APR相关转录因子的调控网络。这些结果为证明文昌鱼肝盲囊是 脊椎动物肝脏的同源器官提供了重要的支持，同时还说明，文昌鱼肝盲囊也是一 个重要的免疫器官，且在脊椎动物肝脏出现之前的急相反应中起到了非常重要的 作用，为研究脊椎动物肝细胞急相反应的起源和进化提供了新的思路。 血红细胞4．1蛋白是形成和维持血红细胞结构的主要蛋白，它能与细胞膜蛋 白、细胞骨架蛋白和各种转运蛋白相互作用并形成功能复合体，在维持和调节血 红细胞正常的生理结构与功能起着重要作用。在文昌鱼中已经发现了粒细胞和巨 噬细胞的存在，但一直没有发现可以自由循环的血细胞。因此，我们试图并成功 噬细胞的存在，但一直没有发现可以自由循环的血细胞。因此，我们试图并成功 地文昌鱼中克隆得到了具有完整编码框的4．1蛋白的基因(BbP41)，对其结构、 表达及进化进行了分析研究。BbP41基因包括一个1590 bp的最大开放阅读框， 编码529个氨基酸，推测其蛋白分子量为59．3kDa。同源比对发现，BbP41蛋白 与其他物种4．1蛋白的序列相似性高达47．0％．60．8％。文昌鱼BbP41蛋白也有保 守的FERM、FA和CTD结构域，但缺少了SABD结构域。进化分析发现，BbP41 蛋白位于脊椎动物分枝的基部，但不与脊椎动物4．1蛋白的各亚型聚群，说明 BbP41与脊椎动物4．1蛋白同源，而且可能代表脊椎动物4．1蛋白的原始存