《SC3021-2004-水产品中孔雀石绿残留量的测定液相色谱法》.pdfVIP

无公害食品 水产品中孔雀石绿残留量的测定 液相色谱法 SC 3021-2004 发布时间：2004 年1 月7 日 实施时间：2004 年3 月1 日 发布单位：中华人民共和国农业部 1、范围 本标准规定了水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留量的液相色谱测定方 法。 本标准适用于水产品可食部分中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留量的检测。 2、规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引 用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准， 然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡 是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3、术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 孔雀石绿malachite green 属于三苯甲烷染料类，分子式为C H ClN ，绿色结晶体。 23 25 2 注：孔雀石绿的结构式见附录A。 3.2 无色孔雀石绿 leucomalachite green N，N—二甲基苯胺，孔雀石绿在水生生物体中的主要代谢产物，分子式为 C H N 。 23 26 2 注：无色孔雀石绿的结构式见附录A。 4、原理 以乙酸胺盐溶液和乙腈提取样品中的孔雀石绿和无色孔雀石绿后，经过液一 液萃取，固相萃取，用接有氧化柱的C 柱进行高效液相色谱分析，外标法定量。 18 5、试剂 5.1 所有试剂应无干扰峰，应选择优级纯或色谱纯的试剂，分析纯试剂应重蒸。 5.2 孔雀石绿及无色孔雀石绿标准品：孔雀石绿纯度≥90％，无色孔雀石绿纯 度≥90％。 5.3 乙腈：色谱纯。 5.4 二氯甲烷：分析纯。 5.5 盐酸羟胺溶液：0.25g/mL。 5.6 二甘醇：分析纯。 5.7 乙酸铵溶液：0.1mol/L(pH4.5)，0.125mol/L(pH4.5)。 5.8 对甲苯磺酸溶液：0.05mol/L。 5.9 碱性氧化铝：分析纯，粒度0.071mm 0.1501nrn。 5.10 中性氧化铝：分析纯，粒度0.07mm 0.150mm。 5.11 丙基磺酸阳离子树脂：PRS(propylsulfonic acid)，40 μm。 5.12 孔雀石绿标准溶液：准确称取孔雀石绿0.100 0g，用乙腈溶解，定容于 100mL 容量瓶中，使成浓度为1mg/mL 的标准溶液，再用乙腈稀释成0.1lµg/mL 的工作溶液。该溶液应避光保存。 5.13 无色孔雀石绿标准溶液：准确称取无色孔雀石绿0.100 0g，用乙腈溶解， 定容于100mL 容量瓶中，使成浓度为1mg/mL 的标准溶液，再用乙腈稀释成 0.1µg/mL 的工作溶液。该溶液应避光保存。 5.14 二氧化铅：分析纯。 5.15 硅藻土：精制工业硅藻土。 5.16 水：应符合GB/T 6682 的要求。 6、仪器 6.1 高效液相色谱仪：配可变波长检测器。 6.2 电子天平：感量0.0001g。 6.3 匀浆机。 6.4 离心机。 6.5 振荡器。 6.6 旋转蒸 器。 6.7 固相萃取柱：PRS 柱，中性氧化铝柱。 6.8 色谱柱:C 柱。 18 6.9 柱后氧化柱:柱内填料:二氧化铅:硅藻土=1 ∶1。 7、操作方法 7.1 样品处理 7.1.1 取样 鱼去鳞、皮，沿背脊取肌肉；虾去头、壳，取可食肌肉部分；蟹、甲鱼等取 可食部分。所取样品切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm 的小、块后混匀。 7.1.2 称取样品10g 20g(精确到0．001g)，置于匀浆杯中，向杯中依次加3mL 盐酸羟胺溶液、5mL 对甲苯磺酸溶液和20mL 0.1mol/L 的乙酸铵溶液，匀浆2min， 转移到250mL 三角瓶中，用60mL 乙腈洗涤匀浆杯，洗涤液合并到三角瓶中，加 入20g 碱性氧化铝，用振荡器振荡5min，转移至4 支50mL 离心管内