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Sp Sp I基因沉默对前列腺癌细胞CD59表达调控的作用研究 中文摘要 研究背景：前列腺癌(carcinoma of prostate)在欧美发病率极高，近年来，随着人口老龄 化、生活环境和饮食习惯的改变，前列腺癌在我国发病率呈明显上升趋势。前列腺癌大多为腺 癌，常从前列腺的外周发生，最终经局部、淋巴和血行扩散转移。该肿瘤发病隐匿，早期很难 察觉，分子生物学方面的研究已经成为发现、诊断、治疗该疾病的热点。CD59广泛分布于造血 细胞及多种组织细胞表面，保护宿主细胞免受补体攻膜复合物((membrane attack complex，姒C) 的攻击。近年来，国内外研究发现在多种实体肿瘤细胞中CD59分子高表达，推测可能与肿瘤的 发生、发展有关，但其发生机制尚不明确。生物信息学分析，CD59启动子区域没有典型的TATA 盒和CMT盒，但富含Gc盒，其中一35／-70的碱基序列是CD59启动子的关键部位，生物信息 软件分析结果显示此部位正是转录因子Spl特异性地识别Gc盒(GGGGcGGGG)的位点。Spl对 GC盒有很强的亲和力，与许多靶基因的启动转录有关，在细胞增殖、凋亡、分化和肿瘤形成等 过程中起非常重要的作用。研究发现，Spl高表达与胃癌、胰腺癌，前列腺癌的恶性程度呈正 相关，与患者的生存期呈负相关，是影响患者预后的重要因素。因此，以Spl基因作为分子靶 标，有望为肿瘤基因治疗开辟一条新途径。 目的：构建针对Spl基因siRNA真核表达载体，转染前列腺癌细胞PC一3， 研究反式作用因子 Spl对CD59表达的调控作用。 方法：应用siRNA表达载体介导的RNAi技术，构建含特异性Spl基因的重组载体pSUPER-siSpl， 经脂质体法转染前列腺癌PC-3细胞，G418筛选稳定表达转染该基因的阳性细胞克隆，荧光倒 置显微镜下观察转染效率，RT-PCR及Western blot检测转染细胞中Spl和CD59基因的表达情 况，流式细胞术检测CD59的表达，MTT及染料释放试验检测CD59基因抑制后肿瘤细胞对补体 溶破的抵抗作用。 结果：成功构建了Spl基因siRNA真核表达载体，．转染PC-3细胞后，Spl和CD59基因mRNA 表达量均明显降低，流式细胞仪检测CD59分子的表达减少，M1vr和染料释放实验表明CD59基 因受抑制后肿瘤细胞对补体溶破的抵抗作用降低。 结论：siRNA-Spl重组载体有效地抑制了CD59的表达，降低CD59的抗补体活性，结果证明反 式作用因子Spl是CD59表达调控中重要的转录因子，该研究为CD59在肿瘤细胞中高表达的分 子机制提供了新思路，将为肿瘤基因靶向治疗开辟一条新途径。 硕士研究生梁岩(免疫学) 指导教师 高美华教授 关键词CD59；Spl；启动子；补体； R N A干扰；前列腺癌 lUl lUl l l l ll 11)l II Illll IIl Y2044043 英文摘要 The effect of silencing Spl gene on expression of CD59 in prostate cancer ceil by RNA interference Abstract Backgroud Prostate adenocarcinoma is the most commonly diagnosed noncutaneous cancer and second leading catl$e of cancarelated deaths in men．Death due to prostate can(冶r is attributed to metastatic disease in which primary tumors evade the prostate capsule and eventually metastasize． This presents large problem considering that current diagnostic procedures do not readily determine whether individual with indolent disease will develop aggressive metastatic disease．To reduce mortality due to prostate CanCel,it is imperative to develop in-depth understanding of molecular events that during prostate cancer progression and metastasis to ident