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专业学位硕士学位论文Thl 专业学位硕士学位论文 Thl 7细胞相关因子的表达纯化及吸附评价 Expression，purification and adsorption of Thl7 cell-related falctors 作者姓名： 李芷合 学大连理工大学 Dalian University of Technology 万方数据 大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究 大连理工大学学位论文独创性声明 作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究 工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外， 本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请 学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献 均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 学位论文题目：．一塑1 2纽塑捆叁固圣鱼圣垫丝!生垄亟堕葺耷 作者签名： 奎圣金 日期： 兰!垒年—￡月j￡日 万方数据 大连理工大学专业学位硕士学位论文摘 大连理工大学专业学位硕士学位论文 摘 要 自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的 疾病，该疾病的发病机理比较复杂，尚未研究清楚，目前lI缶床上还没有有效成熟的治疗 方法。之前一直认为自身免疫性疾病与机体内T辅助细胞的两个亚群Thl细胞和Th2 细胞有关，当这两个亚群相互作用失去平衡即引起疾病的产生，但是随着研究的深入， 发现这种传统观念无法解释一些疾病的发生发展，而相应的一种新的细胞亚群(Thl7 细胞亚群)的发现能很好的解释许多疑惑，这种新的细胞亚群打破了之前的传统概念， 被发现与自身免疫性疾病有着更为密切的关系，近些年来受到了很多研究学者的关注。 Thl7细胞主要相关效应因子为IL．17、IL一6、TNF—a，从临床上疾病治疗角度出发，关 于Thl7细胞相关因子的检测与去除具有重要的实际意义。本论文对Thl7细胞的主要效 应相关因子进行表达纯化，然后通过典型吸附剂对其吸附评价。具体的研究内容有： (1)TNF．0【的表达纯化。构建表达载体pET23a-TNF—a，转入宿主BL2l(DE3) 中，通过IPTG诱导进行蛋白表达。通过优化条件，得到蛋白最优表达条件为：LB培养 基培养菌体，37℃，175 rpm活化12 h，以l％接种量转接放大培养3 h，用0．1 mM IPTG 诱导培养4 h，目的蛋白的表达量约为1．2 mg／mL，占总蛋白56％。将菌体超声破碎， 0．2％PEI(w／w)沉淀，40％饱和硫酸铵沉淀，Ni—NTA亲和树脂层析后，样品纯度达95％ 以上。 (2)IL．6，IL．17A／17F的表达。通过构建表达载体pPIC9K．IL一6，pPIC9K．IL．17A， 和pPIC9K．IL．17F，电转入GSl 15宿主体内，通过RDB培养基，MM／MD培养基，PCR 扩增筛选鉴定His+Mut+表型，对阳性转化子用YPD培养基于30。C，225 rpm活化14一16 h，以1％接种量转入BMGY培养基于30。C，225 rpm培养至OD600为2—6，接着转入 BMMY培养基使OD600为1左右，25。C，225 rpm培养96 h，每24 h甲醇诱导一次，诱 导量为终浓度1％，IL．6诱导后表达，IL一17A和17F尚未证实有表达。 (3)聚苯乙烯型吸附剂对炎症因子的吸附评价。通过吸附动力学和吸附等温线研 究，证实吸附剂对TNF．0【吸附速率较快，约2 h即接近最大吸附值。聚苯乙烯型吸附剂 与TNF一12．的亲和常数为57 mL／mg，即9，7×105 L／mol，平衡解离常数(Kd)为0．018 mdmL，最大理论结合容量(Qm)为845．49,g／g，吸附剂对IL一6同样具有吸附性。 通过论文研究，获得了Thl7细胞主要相关因子的表达纯化方法，探索了典型吸附 剂对炎症因子的吸附性能，为自身免疫性疾病的相关研究奠定了良好的基础。 关键词：自身免疫性疾病；Yhl7细胞；肿瘤坏死因子；白介素6；白介素17A／F 万方数据 Thl7细胞相关因子的表达纯化及吸附评价Expression，purification Thl7细胞相关因子的表达纯化及吸附评价 Expression，purification and adsorption of Thl 7 cell—related factors Abstract Autoimmune disease(AID)refers to the body’S immune system responsing to the own antigen，which leads to th