实验,陈家龙蔡远.docVIP

植物色素的分离、提取和测定 学号：201204062065 201204062064 姓名：陈家龙蔡源 组别：8组 班级：应工12-2 学院：化工学院 指导老师：黑晓明 —:摘要： 这次的实验内容主要是，叶绿素的提取及测定。首先是配置的一系列的分离叶绿 素的相关试剂。分离叶绿素是用柱层析的方法。分离出的顺序是胡萝卜素，叶绿 索a,叶绿索b,叶黄索。然后画滤液细线，叶绿体中的色索分离(在4种不同 比例的试剂屮分离)。最后观察实验结果，计算数据。还有就是测定胡萝卜素的 透光度。在叶绿素的提取与分离实验中，对操作方法进行了探究，提岀了实验 屮的注意事项常见原因及对策?莫屮对滤纸划线方法设立了对照实验，从而对划线 方法进行了重点改进，以确定最好的方法. 二：关键词：色索，提取，画线，柱层析，紫外分光。 二：刖 B : 现行高中牛物新教材的教学内容中增加了大量的实验，这是党和国家推行素质教 育，培养学生动手能力、创新能力的重大改革。生物实验课在整个屮学阶段的生 物教学中占有举足轻重的地位，我们不仅重视常规实验教学的开展，还不断地研 究实验方法的改进。如叶绿体中色索的提取和分离实验(高中生物原教材中的实 验4,新教材屮的实验8),实验的口的是要求学生理解和掌握提取和分离叶绿体 中色素的方法，探索叶绿休中有儿种色素。它是高中必做实验中难度较大的一个 探究性实验，过去做这个实验所需步骤多，时间长，而且实验结果不令人满意， 为此进行多次研究探讨，进行模拟，对这一实验方法进行了改进，使得实验时间 缩短，实验准确，层析分离的效果明显。 叶绿素种类：胡萝卜素，叶绿素a,叶绿素b,叶黃素。 提取、分离方法： 层析方法：(1)条形滤纸层析(2)圆形滤纸层析 画滤液细线的方法:⑴毛细吸管法⑵硬笔法⑶芒箕法⑷卬泥法 测定：紫外线透光。 木次实验用的方法分别是：圆形滤纸层析，毛细吸管法，紫外线透光。 四：实验部分： 实验仪器与试剂 主要仪器： 载玻片(2.5cm X8cm)4 载玻片(2.5cm X8cm)4片 研钵1个 层析柱(4)3.0cm X 30cm) 1 支 分液漏斗(100mL)2个 玻璃漏斗1个圆底烧瓶（100mL）l个广口瓶(e 3.0cm 玻璃漏斗1个 圆底烧瓶（100mL）l个 广口瓶(e 3.0cm XI 8cm) 1 个 烧杯（50mL）l个 烧杯(lOOmL)l个 烧杯(300mL)l个 锥形瓶（100mL）3个 玻璃棒I支 主要试剂: 硅胶 G(300 g-400 g)C.P. 硅胶 G(300 g-400 g)C.P. 二氯乙烷C.P. 石油瞇(B.P.60°C ?90°C)C.P. 丙酮C.P. 苯 C.P.乙酸乙酯C.P. 苯 C.P. 乙酸乙酯C.P. 乙醇(95%)C.P? 实验内容： 菠菜色索的提取 称取20g洗净后用滤纸吸干的新鲜（或冷冻）的菠菜叶，用剪刀剪碎并与 20mL乙醇拌匀，在研钵中研磨约5min,然后用布氏漏斗抽滤菠菜叶，弃去滤液。 将波菜叶放回研体，每次用20mL3： 2 （体积比）的右油僦一乙醇混合液萃 取两次，每次需加以研磨并且抽滤。合并深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用 10mL水洗涤两次，以除去萃取液中的乙醇。弃去水层，石油醯层用无水硫酸钠 干燥（约15min），用玻璃漏斗塞脱脂棉滤掉干燥剂，滤液滤入圆底烧瓶，留击ImL 做薄层层析，其余用水浴蒸徭浓缩约至ImL为止。 2、薄层层析定性分析 1） 薄层色谱板的制备 称取适量的竣甲基纤维索钠（CMC-Na）,分次加入7CTC水中，配制30 ml 0.5% CMC-Na水溶液。抽滤，滤液煮沸1?2分钟。 2） 取15 ml CMC-Na水溶液，倒入研钵中，加入3 g薄层层析硅胶。研磨 0.5 ho 3） 取三块玻璃片，用研磨棒醮取调制后的硅胶均匀涂在玻璃片上，注意要 使硅胶分布均匀。室温下晾干24小时，在110°C活化1小时，备用。 2）展开剂的配制 用石油醸和乙酸乙酯按不同比例混合，得到不同极性的展开剂：如9:1, 3:1, 1:1, 1:3, 1:9o 3）分离 用毛细点样管吸取少量色素溶液，将其分别滴在薄层板底边约1cm处。点样 时点样管保持垂直，点样要尽量小而圆，点样时不要点破硅胶层，如样品浓度较 稀，可重复点2-3次。点后晾干，同样点样4块薄层板。 薄层层析需在密闭的容器中进行，木实验在广口瓶中进行薄层层析。在广口 瓶中分别装入2）配好的展开剂，展开剂装入高度约为0. 5cm（这高度要小于载玻 片上的滴样高度）。将薄层板放入广口瓶屮，瓶口加盖，注意点样的位置必须在 展开剂液面之上。当展开剂上升到薄层板的3/4高度后，取出薄层板，用铅笔或 小针标记展开剂到达的位置，晾干后，记录展开的各点的中心位置。计算各展开 点的Rf值。 按上述方法测定色索样