vegf165基因修饰huvecs复合bmscs促组织工程骨血管生成的体外实验研究口腔颌面外科专业论文.docxVIP

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2019-01-24 发布于上海
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vegf165基因修饰huvecs复合bmscs促组织工程骨血管生成的体外实验研究口腔颌面外科专业论文.docx

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vegf165基因修饰huvecs复合bmscs促组织工程骨血管生成的体外实验研究口腔颌面外科专业论文

四2 四21I医堂太堂亟±堂位i金奎目录 1．中文摘要 OO·QIII gl 1 2 英文摘要 3 3 前言 6 实验一骨髓间充质干细胞的分离及培养 4．1实验材料 8 4．2实验方法 9 4．3实验结果 12 实验二腺病毒介导VEGFl65转染脐静脉内皮细胞 5．1实验材料 14 5．3实验方法 15 5．4实验结果 19 实验三HUVEC．VEGFl65／BMSC共同促进血管生成的体外研究 6．1实验材料 23 6．2实验方法 23 6．3实验结果 · ．．26 7．讨{仑 · ·· · ” ．．．．．．31 8 结论 39 万方数据 9 9 参考文献 40 10部分英文缩略词 45 1 l 致谢 ·· · ·· · 46 12 血管化在骨缺损修复中的研究进展(综述) 47 万方数据四川I医科大学硕士学位论文VEGFl 四川I医科大学硕士学位论文 VEGFl 65基因修饰HUVECs复合BMSCs促组织工程骨血管生成的体外实验研究摘要目的：由于肿瘤、外伤、感染等原因造成的骨组织缺损是临床上的常见疾病，机体骨组织由于自身再生修复能力有限，骨缺损后的修复～直是一大难题。目前组织工程骨可用于大部分中、小尺寸骨缺损的修复，在大尺寸骨缺损中使用受限，主要是由于修复大尺寸的骨缺损时组织工程骨中心部位不能及时的实现早期血管化，中心部位继而发生缺血坏死，这将导致修复失败。因此可见，组织工程骨能否实现早期血管化直接影响使用组织工程骨修复骨缺损治疗的成败。新血管生成主要有两种方式，一种是来源于周围血管的出芽生长，另一种是由内皮细胞形成新生血管。由于早期周围血管出芽方式形成血管的空间范围有限，在大块组织工程骨的中心部位的早期血管化同时需要通过前期移植到人工支架内部的内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建形成。有效的组织工程骨早期血管化成为目前亟待解决的难题，如何促进大块组织工程骨早期血管化也成为目前研究的热点。种子细胞和生物活性因子是组织工程骨构建时的重要要素，目前很多研究证实，通过细胞共培养以及添加生物活性因子来促进血管生成均是很好的促进早期血管化的方法。本研究将腺病毒载体介导VEGFl65基因转染脐静脉内皮细胞后与骨髓间充质干细胞共同作为组织工程的种子细胞进行体外共培养，并通过观察处理后脐静脉内皮细胞的迁移、增殖及成管能力来检测早期成血管能力，为组织工程种子细胞的选择提供 ’种新的方案。我们推测VEGFl65基因转染内皮细胞后联合骨髓问充质干细胞共培养能促万方数据进早期血管生成，将二者共同作为种子细胞能更好的促进早期血管化。方进早期血管生成，将二者共同作为种子细胞能更好的促进早期血管化。方法：1．无菌条件下取小鼠双侧股骨骨髓，采用全骨髓贴壁法分离培养、纯化小鼠骨髓问充质干细胞。2．将HUVECs按照如下分组：①转染共培养组： AdVEGFl65一HUVECs+BMSCs；②转染非共培养组：AdVEGFl65一HUVEC；③空载体共培养组：AdGFP—HUVECs+BMSCs；④空载体组：AdGFP-HUVECs；⑤未转染共培养组：HUVECs+BMSCs；⑥空白对照组：HUVECs。3．将以上各组利用T ranswell间接共培养，通过CCK8检测实验检测脐静脉内皮细胞的生长，绘制细胞活力生长曲线；Transwell实验检测各组脐静脉内皮细胞的迁移能力； Matrigel实验测定脐静脉内皮细胞血管形成能力。结果：1．全骨髓贴壁法成功分离、纯化、骨髓间充质干细胞。2．腺病毒成功将携带VEGF 165基因的重组质粒转染进脐静脉内皮细胞。3．内皮细胞转染VEGFl65以及将内皮细胞和BMSCs共培养后使内皮细胞生长活力、迁移能力和成管能力增强。结论：1．全骨髓贴壁法成功的培养、分离得到骨髓间充质干细胞。 2．在MOI=30时体外成功转染HUVECs，病毒的转染未影响细胞的正常增殖。 3．转染VEGFl65基因以及利用细胞共培养技术均有利于HUVECs增殖。两种方法同时应用能很好的促进血管形成，其促血管形成能力比二者单一应用时更强。4．将转染VEGFl65后的内皮细胞和骨髓间充质干细胞共同作为种子细胞能更好的促进早期血管生成。关键词：内皮细胞；骨髓间充质干细胞；血管内皮生长因子165；基因转染万方数据 In In vitro studies of angiogenic between VEGFl65 gene-modified umbilical vein endothelial cells CO—cultured with bone marrow mesenchymal stem cells Abstract：bjective：Bone defe