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光学显微镜的分辨率 由于光波的波动性,使得由透镜各部分折射到像平面上的像点及其周围区域的光波发生相互干涉作用,产生衍射效应。一个理想的物点,经过透镜成像时,由于衍射效应,在像平面上形成的不再是一个像点,而是一个具有一定尺寸的中央亮斑和周围明暗相间的圆环所构成的Airy斑。如图5-1所示。 透镜分辨率 测量结果表明Airy斑的强度大约84%集中在中心亮斑上,其余分布在周围的亮环上。由于周围亮环的强度比较低,一般肉眼不易分辨,只能看到中心亮斑。因此通常以Airy斑的第一暗环的半径来衡量其大小。根据衍射理论推导,点光源通过透镜产生的Airy斑半径R0的表达式为: (5-1) 通常把两个Airy斑中心间距等于Airy斑半径时,物平面上相应的两个物点间距(Δr0)定义为透镜能分辨的最小间距,即透镜分辨率(也称分辨本领)。由式5-1得: 即 (5-2) 对于光学透镜,当n?sinα做到最大时(n≈1.5,α≈70-75°),式(5-2)简化为: 有效放大倍数 上式说明,光学透镜的分辨本领主要取决于照明源的波长。半波长是光学显微镜分辨率的理论极限。可见光的最短波长是390nm,也就是说光学显微镜的最高分辨率是≈200nm。 一般地人眼的分辨本领是大约0.2mm,光学显微镜的最大分辨率大约是0.2μm。把0.2μm放大到0.2mm让人眼能分辨的放大倍数是1000倍。这个放大倍数称之为有效放大倍数。光学显微镜的分辨率在0.2μm时,其有效放大倍数是1000倍。 光学显微镜的放大倍数可以做的更高,但是,高出的部分对提高分辨率没有贡献,仅仅是让人眼观察更舒服而已。所以光学显微镜的放大倍数一般最高在1000-1500之间。 如何提高显微镜的分辨率 根据式(5-3),要想提高显微镜的分辨率,关键是降低照明光源的波长。 顺着电磁波谱朝短波长方向寻找,紫外光的波长在13-390nm之间,比可见光短多了。但是大多数物质都强烈地吸收紫外光,因此紫外光难以作为照明光源。 更短的波长是X射线。但是,迄今为止还没有找到能使X射线改变方向、发生折射和聚焦成象的物质,也就是说还没有X射线的透镜存在。因此X射线也不能作为显微镜的照明光源。 除了电磁波谱外,在物质波中,电子波不仅具有短波长,而且存在使之发生折射聚焦的物质。所以电子波可以作为照明光源,由此形成电子显微镜。 电子波长 根据德布罗意(de Broglie)的观点,运动的电子除了具有粒子性外,还具有波动性。这一点上和可见光相似。电子波的波长取决于电子运动的速度和质量,即 (5-4) 式中,h为普郎克常数:h=6.626×10-34J.s;m为电子质量;v为电子运动速度,它和加速电压U之间存在如下关系: 即 (5-5) 式中e为电子所带电荷,e=1.6×10-19C。 将(5-5)式和(5-4)式整理得: (5-6) 不同加速电压下的电子波波长 加速电压U/KV 电子波波长λ/nm 加速电压U/KV 电子波波长λ/nm 电磁透镜 电子波和光波不同,不能通过玻璃透镜会聚成像。但是轴对称的非均匀电场和磁场则可以让电子束折射,从而产生电子束的会聚与发散,达到成像的目的。人们把用静电场构成的透镜称之“静电透镜”;把电磁线圈产生的磁场所构成的透镜称之“电磁透镜”。 静电透镜 当电子在电场中运动,由于电场力的作用,电子会发生折射。我们将两个同轴圆筒带上不同电荷(处于不同电位),两个圆筒之间形成一系列弧形等电位面族,散射的电子在圆筒内运动时受电场力作用在等电位面处发生折射并会聚于一点(图5-2)。这样就构成了一个最简单的静电透镜。透射电子显微镜中的电子枪就是一个静电透镜。 电磁透镜 电子在磁场中运动,当电子运动方向与磁感应强度方向不平行时,将产生一个与运动方向垂直的力(洛仑兹力)使电子运动方向发生偏转。 图5-3是一个电磁线圈。当电子沿线圈轴线运动时,电子运动方向与磁感应强度方向一致,电子不受力,以直线运动通过线圈;当电子运动偏离轴线时,电子受磁场力的作用,运动方向发生偏转,最后会聚在轴线上的一点。电子运动的轨迹是一个圆锥螺旋曲线。 电磁透镜 短线圈磁场中的电子运动显示了电磁透镜聚焦成像的基本原理。实际电磁透镜中为了增强磁感应强度,通常将线圈置于一个由软磁材料(纯铁或低碳钢)制成的
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