促渗肽——药物的设计合成与活性评价生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

硕士学位论文促渗肽一药物的设计合成与活性评价 硕士学位论文 促渗肽一药物的设计合成与活性评价 Design，synthesis and activity evaluation of penetrating peptide—drug 作者姓名： 王基云 学科、 专业： 生塑丝堂皇筮王生塑堂 学 号：指导教师： 完成日期： 大连理工大学 Dalian University of Technology 万方数据 ㈣必大连理工大学学位论文独创性声明 ㈣必 大连理工大学学位论文独创性声明 作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究 工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外， 本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请 学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献 均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 学位论文题目： 促洼肽：荭堑鲍遮i土佥盛生适性迁俭 作者签名： 五盔：墨 日期： 卫盛年—L月—坚日 万方数据 大连理工大学硕士学位论文摘 大连理工大学硕士学位论文 摘 要 促渗肽作为生物促渗剂，是促进药物透过细胞或者皮肤的有效方法之一，共价结合 或者物理混合药物后，可提高药效，使其获得新的理化性质以及协同作用。因其具有良 好的生物相容性、促渗效果好、转运效率高、无局限性等优势。为药物输送领域的发展 提供了新的方向和思路，因此促渗肽在肿瘤治疗、生物学研究、以及医药等领域都具有 重要的研究意义。 促渗肽TD．1是通过噬菌体展示技术发现的一个具有l 1个氨基酸的阳离子环肽，与 胰岛素等大分子蛋白物理混合后，可以促进其透过皮肤进入体循环从而发挥生物学效 应。本课题组在TD．1的基础上通过双赖氨酸取代多肽骨架，设计合成的多肽TD．34， 表现出更好的跨膜转运和经皮促渗活性。本研究以促渗肽TD．34为研究对象，选择了阿 霉素(DOX)和甲氨蝶呤(MTx)两种抗癌药为药物模型，首先利用固相合成法合成 促渗肽TD．34，并通过化学法将TD一34与两种小分子化合物进行共价连接，经反相高效 液相色谱检测纯度，由电喷雾电离质谱进行分子量鉴定，与计算分子量一致，证明成功 合成了促渗肽TD．34以及两种结合物。 细胞毒性实验分别检测了TD．34、混合物及共价结合物对三种癌细胞系(MCF．7、 MDA．MB．231、Caeo．2)的细胞毒性，结果显示两种作用方式比单独的药物处理对细胞 的毒性都有所增强，但两种作用方式之间没有表现出明显差异。提高混合物中促渗肽的 比例后，细胞毒性明显增强，且可克服癌细胞的抗药性，产生比敏感型细胞更强的作用 效果。 通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪分别观察、测定肿瘤细胞对DOX的摄取和保留 情况，进行定性和定量的比较分析。结果发现TD．34可促进DOX在MCF．7(人乳腺癌 细胞系)和Caeo．2(人结肠腺癌细胞)的细胞吸收和保留，且主要通过与细胞膜的相互 作用来完成，并且观察到Caco一2细胞单层膜的完整性被破坏，表面粗糙程度增加，说 明TD．34可能打开Caco一2细胞问的连接结构，通过旁路途径促进药物吸收。 关键词：促渗肽；多肽固相合成；抗肿瘤活性；耐药性 万方数据 促渗肽．药物的设计合成与活性评价Design，synthesis 促渗肽．药物的设计合成与活性评价 Design，synthesis and activity evaluation of penetrating peptide-drug Abstract As biological penetration enhancers．penetrating peptides are aIl effective way to promote the drug through the skin or cells by covalent binding or physical mixing with drugs， this Call increase efficacy，obtain new physical and chemical properties as well as synergy． Because of its advantages，such as excellent biocompatibility，penetration effect，high transfer efficiency，no limitations，and SO on，it offers a new direction and idea for the development of the field of drug delivery，SO penetra