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关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体， 均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文 收录到《中国学位论文全文数据库》，并向社会公众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：幺概疑 导师签名：触5， 日 期：≯沙，反f f 万方数据 符号说明Amp：Ampicillin，氨苄青霉素 符号说明 Amp：Ampicillin，氨苄青霉素 Bp：Base pair,碱基对 CaMV35S：35S promoter of califlower mosoic virus，花椰菜花叶病毒35S启动子 cDNA：Complementary DNA，互补DNA ddH20：Distilled and deionized water,超纯水 dNTP：Deoxyribonucleoside triphosphat，脱氧核糖核苷三磷酸 DCL 1：DICER-LIKE 1，RNaselII酶 DNA：Deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸 DEPC：Diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯 DRB 1：double RNA binding protein，双链RNA结合蛋白 E．coli：Escherichia coli，大肠杆菌 EB：Ethidium bromide，溴化乙锭 IPTG：Isopropylthio b D galactoside，异丙基 b D硫代半乳糖苷 Kan：Kanamycin，卡那霉素 LB：Luria-Bertani medium，LB培养基 MicroRNA：miRNA，小分子RNA Md：Malus domestic，苹果 mg：Milligram，毫克 min：Minute，分钟 NACl：NAM／ATAF／CUC，含有NAM／ATAF／CUC结构域的基因 OD：Optical density,光密度 ORF：Open reading frame，开放阅读框 pH：Pondus hydrogenii，氢氧离子浓度指数 PCR：Polymerase chain reaction，聚合酶链式反应 RISC：RNA·induced silencing complex，RNA诱发的基因沉默复合体 RNA：Ribonucleic acid，核糖核酸 Rpm：Revolutions per minute，转／分钟 RT-PCR：Reverse transcription PCR，反转录PCR 万方数据 Rif：Rifampicin，利福平SE：C2H2 Rif：Rifampicin，利福平 SE：C2H2 Zn．finger protein SERRATE，C2H2锌指型锯齿状蛋白 gg：Microgram，微克 WT：Wild．type，野生型 YEP：Yeast extract and peptone medium，YEP培养基 万方数据 目录中文摘要 目录 中文摘要 I 英文摘要 III 1前言 1 1．1生长素的相关研究 ．．1 1．1．1生长素的重要性 一1 1．2 HYLl(DIml)以及相关miRNAs的研究 ．1 1．2．1植物中HYLl调控的miRNAs的研究 ．1 1．2．2果树MircoRNAs的研究进展 ．．3 1．2．3 HYLl(DRBl)对生长素的响应 3 1．2．4 miRl56和miRl72的相关研究 4 1．2．5苹果中HYLl基因的初步分析 。5 1．3本研究的目的和意义 ．．6 2材料和方法 一8 2．1实验材料 ．．8 2．1．1植物材料 8 2．1．2菌株及载体 8 2．1．3酶、试剂盒、引物合成及测序 8 2．1．4试剂材料 8 2．1．5实验仪器 9 2．2实验方法 ．．9 2．2．1植物基因组DNA的提取 9 2．2．3反转录cDNA第一链的合成 10 2．2．4苹果MdDRBl基因克隆与载体构建 11 2．2．4．1拖缈尺8J序列的扩增 ．．11 2．2．4．2 MdDRBl表达载体的构建 ．．11 2．2．4．3 PCR扩增产物的回收 ．12 2．2．2．4 P