截短型胰高血糖素样肽1的融合构建与表达-生物通.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（８）：１９～２５ 截短型胰高血糖素样肽 １的融合构建与表达 ? １ １ ２ 高　华 　许崇波 　李　元 （１大连大学医学院辽宁省生物有机化学重点实验室　大连　１１６６２２） （２大连帝恩生物工程有限公司　大连　１１６６００） 摘要　为了延长截短型胰高血糖素样肽 １（ｓｈｏｒｔｅｄｇｌｕｃａｇｏｎｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１，ｓＧＬＰ１）在血浆中的半 ? ? ? 衰期，将ｓＧＬＰ１的Ｃ端与人血清白蛋白（ｈｕｍａｎａｌｂｕｍｉｎ，ＨＳＡ）的Ｎ端通过６个氨基酸的柔性连 ? 接子融合在一起，构建了融合表达菌株ＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓＧＳ１１５／ｓＧＬＰ１ＨＳＡ。以４ｇ／ＬＧ４１８筛选出 ?? 来的阳性工程菌株，经５Ｌ发酵罐培养，甲醇诱导４８ｈ，表达量可达０．８ｇ／Ｌ。培养液经超滤、葡聚糖 Ｇ２５除盐、蓝色凝胶亲和层析纯化后，经ＨＰＬＣ分析产物纯度达９５％，回收率达６０％。正常小鼠 ? 糖耐量实验和对ＧＫ 型糖尿病模型鼠的治疗证明ｓＧＬＰ１／ＨＳＡ具有明显的降糖效果，为获得大 Ⅱ ? 量ｓＧＬＰ１／ＨＳＡ融合蛋白进行临床实验研究奠定了基础。 ? 关键词　截短型胰高血糖素样肽 １　 型糖尿病　巴斯德毕赤酵母　融合表达 ? Ⅱ 中图分类号　Ｑ７８６ 　　胰高血糖素样肽 １（ｇｌｕｃａｇｏｎｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１，ＧＬＰ１） 还是降血糖作用的胰高血糖素样肽 １，在羧基端都具有 ? ? ? ? 是由肠道内分泌细胞 Ｌ细胞分泌的由３０个氨基酸组 一定的同源性，据此提出了“清除受体”假说。该假说 成的多肽激素，通过与胰岛 细胞表面的特异性受体 β 认为羧基端结构与其清除作用有关。根据这一理论假 结合，刺激胰岛素分泌，同时竞争性抑制胰高血糖素受 说，化学合成多条ＧＬＰ１肽链，将体内活性检测较理想 ? 体，降低胰高血糖素浓度，使葡萄糖诱导的胰岛素分泌 的序列命名为截短型胰高血糖素样肽 １（ｓｈｏｒｔｅｄ ? 显著增强［１］。ＧＬＰ１的肠促胰岛素作用依赖于葡萄糖 ? ｇｌｕｃａｇｏｎｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１，ｓＧＬＰ１）。ｓＧＬＰ１特点为：一： ? ? ? 浓度，用其治疗糖尿病不会发生低血糖。另外，ＧＬＰ１ ? 为抵抗清除作用，将 ＧＬＰ１羧基端５个氨基酸残基去 ? 可以促进 细胞新生，抑制凋亡。ＧＬＰ１在胃肠道可 β ? 掉；二：为抵抗二肽激肽酶 降解作用，将 ＧＬＰ１第二