kifc1高表达对非小细胞肺癌增殖及预后的影响内科学呼吸病学专业论文.docxVIP

硕士学位论文定量聚合酶链式反应(quantitative 硕士学位论文 定量聚合酶链式反应(quantitative reverse—transcription polymerase chain reaction， qRT-RCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(weStem blotting，WB)的方法对KIFCl的表达 进行检测；再次，应用免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)的方法，在组 织微阵列芯片(tissue microarrays，TMA)中检测KIFCl的表达，并分析其与预后的 关系。 2．KIFCl在肺癌细胞系生长中扮演的角色及其作用机制的研究 首先，我们从中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 选购状态良好的三株人的NSCLC细胞系，包括A549、H1299和SPC．A1，并在 合适的培养条件进行培养；其次，从上海吉玛公司订购KIFCl的siRNA和空白 对照的siRNA对三个细胞株分别进行干扰，用qRT-RCR和weStem blotting的方 法检测干扰效率；再次，采用MTT、克隆形成以及流式细胞分析(flow-cytometric analysis，FCA)等技术对干扰后细胞系的生长速度、克隆形成能力以及细胞周期 等进行分析；最后，通过比较转染KIFCl的siRNA和空白对照的siRNA对细胞 系生长速度和周期的影响并结合相关文献报道，利用western blotting的方法对现 象进行更进一步的分子机制的研究。 结果 1．原发性肺癌组织中KIFCl表达的检测以及与生存预后的关系 1．1公共数据库中KIFCl在原发性肺癌组织中的表达情况 Oncomine(www．oncomine．org)数据库中包括Garber、Hou、Selamat和 Okayama在内的多个有关原发性肺癌的统计研究都显示，无论是小细胞肺癌还是 非小细胞肺癌，在肺癌组织中KIFCl mRNA的表达均明显高于配对的正常组织。 1．2公共数据库中KIFCl的表达与肺癌预后的关系 Kaplan-Meier plotter fhup：／／kmplot．com／analysis／index．php?p=background)数 据库中显示，高表达KIFCl的非小细胞肺癌患者较低表达KIFCl的患者拥有更 短的无进展生存期(progress．flee survival，PFS)以及更差的总生存期(overall survival，OSl，且两者具有明显的统计学差异。当对腺癌和鳞癌进行亚组分析时， 腺癌患者中仍可得到相同的结果；而在鳞癌患者中，与KIFCl高表达相比，低 表达KIFCI的患者拥有较长的PFS，但在OS方面并没有显著的统计学差异。 III 万方数据 中文摘要1．3临床标本中检测KIFCl的表达 中文摘要 1．3临床标本中检测KIFCl的表达 采用qRT-RCR的方法分析40例临床接受手术切除治疗的NSCLC患者癌组 织及配对的正常组织的mRNA的表达，结果显示有28例患者癌组织中的KIFCl 是过表达的，两者具有明显的统计学差异(P0，001)。Western blotting分析也显 示，蛋白质水平KIFCl在癌组织的表达也明显高于配对的正常组织。 1．4组织芯片中KIFCl表达的检测 为了更进一步验证KIFCl在肺癌组织较正常组织表达高，我们采取了多中 心的研究方案。对上海芯超公司的肺癌微阵列组织芯片(TMA)进行免疫组化(IHC) 的染色，结果发现在90例配对组织的患者中，有83例患者癌组织中KIFCl的 表达高于其正常组织；癌组织中，若以免疫评分的平均值为截断点，则有65．6％ (56／90)的患者为ⅪFCl的高表达。 1．5 TMA中患者KIFCl的表达与生存之间的关系 TMA中包含90例肺癌患者，自手术之日起开始随访，随访时间为5．10年。 剔除8例非腺癌患者后，剩余的82例肺腺癌患者中有51例患者存在KIFCl的 高表达，31例患者属于低表达，生存分析显示KIFCl高表达的患者拥有更短的 0s，两组具有明显的统计学差异饵=0．04)。 2．KIFCl在肺癌细胞系生长中扮演的角色及其作用机制的研究 2．1 KIFCl siRNA可以有效的沉默肺癌细胞系中KIFCl的表达 我们选取三株常用的NSCLC细胞系：A549、H1299和SPC—A1，分别用KIFCl siRNA和空白对照的siRNA对细胞系进行干扰，24小时后提取RNA进行qRT- RCR，48小时后提取蛋白质进行Western blotting；结果发现，无论在蛋白质水 平还是在mRNA水平，与空白对照的siRNA处理组相比，经过不同的si．KIFCl．1 和si—KIFCl．2干扰后明显降