雌激素水平低下对学习记忆的影响与益智方的作用及作用机理研究中药学中药药理学专业论文.docxVIP

Y Y 60‘25￡ 独创。陛声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所 知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果，也不包含为获得北京中医药大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同 工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 签名 日期：驯．E．1 f 关于论文使用授权的说明 本人完全了解北京中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：“学校有权保留送交论 叉的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，也可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文。 (保密的论文在解密后应遵守此规定) 签名 导师签名 日期：。伽够f，f 中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 众所周知，当人的年龄超过40岁后，随着年龄的增加，学习记忆力普遍下降，这给人们 的学习、工作和生活带来无限的烦恼和痛苦。因而研究这种中老年增龄性学习记忆力减退的 原因及提出防治措施，对于日益走向老龄化的当今社会有重要的现实意义。 学习记忆力的衰老性下降与神经元的损伤或失去保护作用有密切的关系。研究认为，雌 激素具有抗氧化和神经营养作用，可减轻神经细胞的损伤或对神经细胞提供保护。临床观察 指出，中老年女性在卵巢萎缩、性功能减退、内分泌紊乱甚至绝经的同时往往伴有明显的记 忆力减退，而补肾类中药大多在明显增强生殖功能的作用的同时具有显著的促智作用。补肾 中药益智的确切作用机理并未完全研究清楚，有些补肾中药具有雌激素样作用，有些则具有 促进雌激素生成的作用，众多研究主要围绕下丘脑．垂体．性腺轴展开，并取得了可喜的成果。 芳香化酶是雌激素的合成限速酶，除在性腺大量存在外，在脂肪、乳腺等组织中也有分布， 最近研究发现，在与学习记忆相关的脑区也有广泛分布。芳香化酶在衰老性记忆力减退过程 中扮演什么角色、是否参与补肾作用或促智过程，值得深入开展研究。 l目的 本研究根据上述假设，运用芳香化酶抑制剂使动物脑内处于低雌激素状态，然后运用行 J,j学方法、电生理技术和形态学年“，考察动物的学习记忆能力及相关指标，为建立一种学 习记忆障碍模型动物奠定基础。 根据中医补肾益智的学说，对具有明显的促智作用的中医复方进行筛选，从行为学、神 经病理学、细胞、内分泌等多方面，着力观察补肾复方对雌激素及其合成酶——芳香化酶的 影响，以便阐明该类复方改善中老年增龄性记忆减退的作用及其作用机理。 2材料与方法 2．1低雌激素动物模型的建立 3月龄雌性SD大鼠，随机分为假手术组(sham)、去卵巢组(OVX)和去卵巢加用依西 美坦(OVX+EXE)组，每组20只，除假手术组外，各大鼠均摘除双侧卵巢，依西美坦组大 鼠按60mg kg。皮下注射，假手术组和去卵巢组皮下注射同容积的溶剂，每三日一次，共给药 30d。然后运用跳台法、避暗法和Morris水迷宫法观察对动物学习记忆能力的影响。行为学 实验结束次日，取一半动物作脑切片，4％多聚甲醛灌注取材，常规石蜡切片，沿海马横轴垂 直方向连续冠状切片。按sP法作芳香化酶免疫组织化学染色，观察芳香化酶的表达及大致 分布。 另一半动物分别用同位素法测血浆和脑内雌激素的含量。用预冷的含有5％乙醇的生理 盐水与脑组织充分匀浆后，离心，取上清。再用碱性二氯甲烷萃取，吹干。次日，以0．1mL95％ 乙醇溶解，最终定容至O．5mL，并按试剂盒要求进行测定。‘血清雌激素含量测定，在上述大 鼠断头时取动脉血，4℃冰箱放置过夜．次日，离心，取200 L血清，按试利盒要求过行删 雌激素低下对学习记忆的影响及益智方的作用与作用机制研究定。按试剂金方法测大脑皮层Ache、NE和DA。 雌激素低下对学习记忆的影响及益智方的作用与作用机制研究 定。按试剂金方法测大脑皮层Ache、NE和DA。 2．2益智方的筛选 运用混料均匀设计法对益智方进行拆方分析，考察方中各类药对上述模型小鼠学习记忆 行为的影响。益智方由安神(X1)、补肾(X2)、健脾(x3)三类中药组成，以这三类中药作 为考察因素，选择均匀设计表u5(52)，配制5种不同的复方，每个水平不重复出现。取80 只雌性小鼠，70只摘除卵巢，10只作假手术。10d后对去卵巢存活小鼠进行阴道涂片，取阴 道角化细胞阴性持续7d者供实验用，饲养20周后，取其中40只，随机分为5组，每组8 只作为5个复方给药组，按159生药-kg。剂量灌胃给药；另取其中20只分为2组，每组10 只，分别为模型组和雌二醇组，假手术lO只作对照组，前者按O．2mg·kg“给小鼠皮下注射苯 甲酸雌二醇，4日一次，后者以5％吐温_80替代药物灌胃，每日一次，各组均连续给药32d。 通过去卵巢尽鼠在Morris水迷宫中的行为学变化，测试