yapyesassociatedprotein在兔耳增生性瘢痕中表达的实验研究外科学专业论文.docxVIP

四川医科大学硕士学位论文目 四川医科大学硕士学位论文 目 录 YAP(yes—associated—protein)在兔耳增生性瘢痕中表达的实 验研究 1 1．1 中文摘要 1 1．27 英文摘要 5 1．3 前言 lO 1．4 材料与方法 15 1．5 结果 21 1．6 讨论 36 1．7 结论 45 1．8 参考文献 46 1．9 英汉缩略词对照表 50 2 致谢 51 3 瘢痕治疗研究进展(综述) 52 万方数据 四川医科大学硕士毕业论文YAP(yes—associated—protein)在兔耳增生性瘢痕中 四川医科大学硕士毕业论文 YAP(yes—associated—protein)在兔耳增生性瘢痕中 表达的实验研究 中文摘要 目的：Hippo信号通路是在果蝇身上发现控制器官大小的重要信 号通路，yap蛋白是其中重要核心组件。组织器官对外界机械张力转 化为生物化学分子效应与Hippo信号通路密切相关。创面愈合及瘢痕 形成涉及一系列复杂生物细胞学过程，增生性瘢痕的发生与多方面因 素相关，如性别、年龄、体质、感染等，病理上表现则是成纤维细胞 大量增殖及细胞外基质沉淀，yap蛋白与成纤维细胞感受瘢痕压力、 增殖及生长因子的分泌密切相关。本实验拟通过观察兔耳创面愈合至 增生性瘢痕形成这一过程中yap蛋白的表达、分布及变化，探讨yap 蛋白在创面修复及瘢痕增生中的作用，为瘢痕的形成提供分子水平的 理论依据，为瘢痕治疗提供新的思路方法及治疗靶点。方法：选取 lo只新西兰大耳白兔(由泸州医学院动物实验中心中心提供)，雌 雄不限，体重平均2．5—3．OKg。将每只兔子左耳设定为A组，右耳设 定为B组，A组每只大耳兔用打孔器在左耳打3个直径0．6cm圆形全 层皮损至软骨，并彻底破坏软骨膜，热凝止血；B组每只大耳兔耳用 ’打孔器打3个直径。lcm圆形全层皮损至软骨j一彻底破坏软骨膜，热凝 止血，每个创面间隔lcm。其后，每只兔子饲养条件相同，7天后祛 除痂壳。14天时取靠近头部创面；30天时取兔耳中间创面；60天取 剩下创面。将所取标本置于10％中性福尔马林中固定12小时，常规 万方数据 四川医科大学硕士学位论文梯度酒精脱水，浸蜡包埋切片，做免疫组化组织学染色。Yap蛋白免 四川医科大学硕士学位论文 梯度酒精脱水，浸蜡包埋切片，做免疫组化组织学染色。Yap蛋白免 疫组化染色阳性信号为棕黄色颗粒。yap图像分析方法：l、在400 倍显微镜下分别观察各切片中表皮及表皮下细胞中yap阳性颗粒个 数，并计算。每张切片观察5个视野取其均数进行比较。2、用 Image-pr06．0图像分析软件系统，将yap的表达强度用IOD值表示， 每张切片取5个视野，分别测定每个视野的IOD值并取其均数作为该 标本的IOD值，进行比较。结果：一、新西兰大耳白兔瘢痕造模成功 率：A组造模出24个合格瘢痕，成功率为80％，B组造模出27个合 格瘢痕，成功率为90％(模型成功标准：肉眼可见明显创面组织增生、 质硬，瘢痕表面较周围正常组织高出2mm)；二、显微镜下yap免疫 组化染色结果：1、14天时，A组及B组创面周围组织向创面中心回 缩，大部分创面干燥，显微镜下创面肉芽组织、炎性细胞及毛细血管 增生，表皮细胞中yap蛋白主要表达于细胞质，表现为细胞质中可见 细小棕黄色颗粒，此期成纤维细胞数量少，棕黄色颗粒少数发现于细 胞核中；2、30天时，肉眼观察，创面愈合且瘢痕增生明显，增生瘢 痕色红、质硬，瘢痕中心高于周围皮面，B组较A组瘢痕增生明显， 纤维镜下看，瘢痕表面为薄层表皮细胞并伴角化，正常皮肤附件如毛 囊、皮脂腺等缺乏，瘢痕下，部分成纤维细胞生成，呈梭形并排列整 齐，棕黄色颗粒出现于成纤维细胞核，细胞质棕黄色淡染；3、60天 时，肉眼观察，A组部分模型瘢痕较30天缩小，其余个别瘢痕较30 天垂直直径增大，且硬度增加，显微镜下看，瘢痕表皮下大量成纤维 细胞生成，成纤维细胞呈梭形并排列整齐，B组部分瘢痕成纤维细胞 万方数据 四川医科大学硕士学位论文排列紊乱，漩涡状排列形成，个别瘢痕可见玻璃样变。4、70一90天 四川医科大学硕士学位论文 排列紊乱，漩涡状排列形成，个别瘢痕可见玻璃样变。4、70一90天 观察，肉眼见瘢痕缩小，纤维镜下看，成纤维细胞减少，部分正常细 胞结构消失玻璃样变。三、数据统计学分析：l、14天时，B组在阳 性颗粒数、积分光密度、平均光密度数值上均高于A组，且PO．05， 差异具有统计学意义；2、30天时，B组在在阳性颗粒数高于A组，P O．05，差异不具有统计学意义，积分光密度、平均光密度数值上均 高于A组，且PO．05，差异具有统计学意义；3、60天时，B组在 在阳性颗粒数高于A组，PO．05，差异不具有统计学意义，积分光 密度、平均光密度数值