微生物（无菌）检查讲义.docVIP

2011年无菌、微生物限度检查培训班 讲义 《中国药典》2010年版微生物限度（无菌）检查新增修订情况 2010年版《屮国药典》为建国以来的第九版药典。 2007年底开始丁作，2010元丿J正式出版，2010年10月1日起实施（中华人民共和国卫生部公告（第 5号）） 国家局、国家药典委员会、120多家参与单位、数白位专家 第一部分: 无菌检査的新增修订 前言部分 1、新增规定防止污染的措施不得影响供试品屮微生物的检出o 1、新增规定 防止污染的措施不得影响供试品屮微生物的检出o ” 2、新增规定 “ LI常检验还需要对坏境进行监控。” 3 3、新增规定 “无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基部分 1、 删除：1.硫乙醇酸盐流体培养基 后括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说明 2、 删除：2.改良马丁培养基 后括号（用于培养真菌）的说明 3、删除：3.选择性培养基 项下加入适量中和剂或表面活性剂后面的“如対氨基苯甲酸（用于 磺胺类供试品）、聚山梨酯80 （用于非水溶性供试品）或0-内酰胺酶（用于B-内酰胺类供试品）i 土等说明。 修订为：在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。 （中和剂、灭活剂见微生物限度检查法中表1） 4、将原第6. 0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）修订排列为第4. ——按顺序排列归类培养基1.?4.均为宜接用于无菌检査的液体培养基。 培养基灵敏度检查部分 1、修订了黑曲霉的泡子悬液制备方法： 规定应使用含0.05% （v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，洗脱饱子及稀释抱子液， 制成每lml中含孑包子数小于100 cfu的孑包子悬液。 删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）吸出孑包子悬液的操作 方法 2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限：“菌液制备后若在室温下放置，应在2小时 内使用，若保存在2?8°C,可在24小时内使用。黑曲霉孑包子悬液可保存在2°C?8°C,在验证过的 贮存期内使用。” 稀释液、冲洗液及其制备方法部分 在 原有1. 0. 1%蛋白月东水溶液 pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液的基础上新增加：“可根据供试品的特性，选用其他经验 证的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。” 方法验证试验部分 1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌种的基础上，删除了铜绿假单胞菌，增订了大 肠埃希菌。 ——是因在验证试验的实践中，发现作为革兰氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中对 大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好。 供试品的无菌检杳部分 阳性对照用量 原：“若采用宜接接种法，应增加供试品1支（或瓶）作阳性对照用。” 修订为:若采用直接接种法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照 用。 ——因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是I古I体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应按 验证的方法确定。 薄膜过滤法 1、 新增规定：抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜 2、 新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不得过1000ml 3、 新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同验证试验 培养及观察 对于培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长时，删除了「或划线接种于斜面培养基上”的 规定。 同吋删除了可根据斜面是否有菌生长而判断的规定。 结果判断部分 新增订阳性对照管和阴性对照管的实验结果对于整体实验结果判断的作用： —— “阳性对照管应牛长良好，阴性对照管不得有菌牛长。否则，试验无效。” 表1、表2和表3部分 表1 将表1第3列的表题原“每种培养基最少检验数量” 修订为：“接种每种培养基所需的最少检验数量” ——更明确指岀接种到培养基中去的检验 量。 修订了表1下的 注：对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应 加倍。 表2 将表2原名称：“上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量” 修订为：“液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量”。——明确液体制剂最少检验 量见表2的第2列，供试品最少检验数量见表2的第3列。 iO修订了表2下的 注： ——对供试胡容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检 验数量应加倍。 表3 将表3原名称：“上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量” 修订为：“固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量” 明确固体制剂最少 检验量见表3第2列；供试品最少检验数量见表3的第3列。 iQ修订了表3下的 注： ——对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验 数量应加倍。 第二部分： 微生物限度检查的新增修订 总则 1、 表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明对微