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实验十二粗糙链孢霉的杂交.ppt
实验十二. 粗糙链孢霉的杂交 目的与要求 通过对粗糙链孢霉杂交产生的子囊孢子的观察,了解顺序四分子的遗传学分析方法。 观察由于基因转换引起的异常分离现象,进一步验证分离和交换规律。 学习并掌握重组值的计算方法及着丝粒作图的方法。 实验原理 粗糙链孢霉(2n=14)属于真菌门,子囊菌纲,球壳目,脉孢菌属,其菌丝体是单倍的(n=7),基因型能够直接在表型上反映出来,而且生长快,易培养,有性生殖过程以及染色体的结构和功能类似于高等生物,一次杂交就可达到高等二倍体生物一次测交的目的,因而被广泛的用作遗传学研究的材料。 粗糙链孢霉的生殖方式有无性繁殖和有性繁殖两种。 实验原理 在粗糙链孢霉中,一次减数分裂产物包含在一个子囊中,所以很容易看到一次减数分裂所产生的四分体中一对基因的分离,从而直观的证明基因的分离。同时,由于一个子囊中间的空间很小,8个子囊孢子依次紧密排列在其中,就可以测定着丝粒距离并发现基因转变。若两个亲代菌株有某一遗传性状的差异,那麽杂交形成的每一个子囊孢子属于一种类型,它们的分离比例是1:1,而且子囊孢子按一定顺序排列。 实验原理 粗糙链孢霉的生活史 实验材料 野生型(+)——分生孢子桔红色。菌株号2489 赖氨酸缺隐型(Iys)——分生孢子白色(菌株号405或1272) 方法和步骤 1.培养基配制 (玉米培养基)供杂交实验用:将玉米在水中浸泡后,晾干。每试管2-3粒,加入2%琼脂。然后加少量水,在水浴锅中煮沸几分钟,待冷却后插入约3cm长的褶迭的滤纸片,经高压灭菌后作成斜面,待用,菌株保存方法见附录。 2.杂交 用接种针把两个不同接合型的链孢霉的菌株的分生孢子,各少许接种同一管的培养基斜面上,此过程应在严格的无菌操作下进行,接种后放在25℃培养,直到斜面上出现肥满的黑色子囊果,子囊果在低温下可长期保存。此外,并非所见的子囊均有效,因为未“受精”的分生孢子也能形成子囊果(原子囊果)其中无子囊孢子。 方法和步骤 3.子囊孢子分离和交换的观察 将成熟的子囊果从培养基中小心挑出,放于滴有1-2滴5%次氯酸钠溶液的载玻片上(若附着分生孢子太多可先在5%次氯酸溶液中洗去),再放上一片载玻片轻轻一压将子囊果压碎,使里面的许多子囊彼此分开,就可在解剖镜下八个子囊孢子的分离和有规律的排列。 八个子囊孢子中四个黑色的是野生型(+),四个白的是赖氨酸陷(一)。 它们有六种排列顺序: ① ++++-- -- 非交换型 ② ----++++ ③ ++--++-- ④ --++--++ 交换型 ⑤ ++----++ ⑥--++++-- 计算交换值: ? 交换型子囊数 1 交换值 = ————————×——×100% 观察到的子囊总数 2 显微镜观察结果 注意事项 1.实验用过的接种针要过火灭菌。 2.镊子放入次氯酸钠中浸泡5分钟洗净。 3.三角瓶中的液体要煮沸5分钟后,才能倒掉。(不要把未煮沸的菌液就倒入水槽中),洗净瓶子。 4.用过的载玻片立即放入石炭酸缸中浸泡,以杀死子囊孢子。 思考题 1.链孢囊杂交后,减数分裂过程怎样? 2.链孢霉的分离现象与高等动、植物有何区别? 3.计算交换值时,为什么要除以2? * *
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