黄芪葛根药对对乙醇诱导的胃粘膜损伤的保护中西医结合临床专业论文.docxVIP

广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明： 广州中医药大学学位论文原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均 已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名盔整堑 日期：2p，j，年}月堋 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向 国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广9、l,leP 医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名垒髫函 论文导师签名，乡P_／ Et期：却，，年，月各-日 摘 摘 要 研究背景： 近年来我国饮酒人群的数量以及酒精消费数量逐年增加，因饮酒引起的消化系统 疾病，已经成为一个严重的社会问题与医学问题。饮酒导致的消化系统疾病多为胃炎、 胃溃疡、十二指肠溃疡、酒精性肝病、肝硬化等；长期饮酒还可以诱发肠上皮化生， 肠上皮化生是胃粘膜病变向胃癌过度的一个阶段。 药对研究是中药复方研究的重要组成部分，也是研究中药复方的一个突破口。黄 芪一葛根药对首见于清代医书《证治汇补》中所记载的黄芪葛根汤，原方中黄芪与葛 根的配伍比例为2：1，历代多位医家认为此方具有解酒毒的作用。前期动物实验研究 发现，黄芪苷类可以减轻乙醇对胃粘膜的损伤。黄芪甲苷与黄芪总苷可以促进已损伤 的胃上皮细胞GES一1的修复，其作用机制与黄芪甲苷、黄芪总苷参与细胞凋亡等相关 通路有密切联系。因此本研究以黄芪～葛根药对为切入点，探讨其保护胃粘膜损伤的 物质基础与相关机制。 目的： 优选黄芪～葛根药对保护胃粘膜损伤的最佳水煎工艺：建立黄芪一葛根药对不同 配伍比例的高效液相指纹图谱，通过谱效关系的研究，明确黄芪一葛根药对中的异黄 酮类成分对保护胃粘膜损伤的贡献大小；初步探讨黄芪一葛根药对保护乙醇诱导胃粘 膜损伤的机制。 方法： 1．正交试验结合药效学实验优选黄芪一葛根药对抗乙醇诱导胃粘膜损伤最佳水 煎工艺。以黄芪一葛根药对水煎液中葛根素的化学含量作为评价指标，以乙醇对小鼠 胃粘膜损伤分数作为药效指标，设计『F交试验，对药对煎药的时间、煎药的次数、煎 药水量3个因素，分别分为3个水平进行综合考察，优选出黄芪一葛根药对(2：1 配伍)保护胃粘膜的最佳水煎工艺。 2．高效液相色谱法建立黄芪一葛根药对不同配伍比例(3：1、2：1、1：1、1：2、 l：3)的指纹图谱；将不同配伍的黄芪一葛根药对指纹图谱共有峰相对峰面积与小鼠 胃粘膜损伤分数进行灰色关联分析，通过关联度大小，明确药对中已鉴别的异黄酮类 化学成分对胃粘膜保护作用的贡献度。 3．观察黄芪一葛根药对对乙醇诱导大鼠胃粘膜损伤的保护。测量并计算肉眼下胃 粘膜损伤分数与光镜下病理切片胃粘膜损伤分数。HE染色病理切片观察黄芪一葛根 药对对不同实验组大鼠胃粘膜损伤形态学的影响。 4．观察药对对凋亡信号通路关键基因与蛋白的影响。通过Real time PCR、免疫 组织化学、Western-blot法检测药对对凋亡信号通路Bcl一2／Bax／Caspase-3基因与蛋白 表达的影响。 表达的影响。 结果： I．黄芪～葛根药对(2：l配伍)按照煎煮3次，每次30 rain，10倍水量的水煎 工艺所煎煮的药液中葛根素含量(15．90±O．04mg／mL)高于其它中药组，其小鼠胃粘 膜损伤分数(14．8±11．8)低于其它给药组。黄芪一葛根药对煎煮30 min，煎煮3次， 加lO倍水作为本研究的最佳水煎工艺。 2．黄芪一葛根药对不同配伍比例(3：1、2：1、1：1、1：2、1：3)对乙醇诱导‘ 小鼠的胃粘膜损伤均有保护作用，均可以降低小鼠胃粘膜的损伤分数，其中3：l配 伍组胃粘膜损伤分数低于其它配伍组，其保护胃粘膜损伤的效果优于其它配伍组。与 已知对照品比较，鉴别出黄芪一葛根药对中的8个异黄酮类化学成分分别是：染料木 素、染料木苷、葛根素、毛蕊异黄酮、大豆苷、大豆苷元、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒 柄花素。通过将HPLC指纹图谱获得的药对共有峰峰面积与小鼠胃粘膜损伤分数相关 联，得到8种异黄酮类化学成分对胃粘膜保护作用的贡献度依次为：染料木素葛根 素大豆苷元大豆苷芒柄花素毛蕊异黄酮染料木苷毛蕊异黄酮葡萄糖苷。 3，肉眼观察发现，正常组大鼠胃组织粘膜表面呈现淡粉色，粘膜表面连续、光滑、 无破损、无充血；模型组大鼠粘膜色鲜红、呈现出线状或斑点状出血；与模型组相比 较，各预防给药组粘膜