肝肿瘤促进ths升高及抑制ths抗肿瘤作用的机制动物学专业论文.docxVIP

大连医科大学硕士学位论文目 大连医科大学硕士学位论文 目 录 一、摘要 。1 (一)中文摘要 ．1 (二)英文摘要 ．2 二、正文 ．．6 (一)前言 6 (二)材料与方法 ．7 ¨实验动物 ．7 1．2主要试剂与仪器 7 1．2．1主要试剂 ．7 1．2．2主要仪器 ．8 】．3 方法 8 1．3．1血清样本的采集 8 1．3．2组织样本的采集 8 1．3．3肝组织病理切片的制备及分析 8 1．3．4酶联免疫法检测血清中T3和T4水平 l 0 1．3．5总RNA提取和荧光定量PeR法检测基冈mRNA的表达水平 10 1．3．6体内抑制实验 ．．13 1．3．7肿瘤个数和大小计算方法 1 3 1．3．8蛋白质印迹法检测蛋白表达水平 ．13 】．3．9甲fE幂13甲减模型的制备及采样 ．I 5 1．3．10肿瘤个数和大小计算方法 16 【．4统计学方法 16 (三)结果 16 1病理分析 ．16 2不同月龄小鼠肝／体质量的检测 ．．17 3不同月龄小鼠血清中总T3／T4和游离T3fT4水平的检测 ．17 4 TBG转录水平的检测 19 5 Diol转录水平的检测 20 万方数据 大连医科大学硕士学位论文6 大连医科大学硕士学位论文 6 Cyclin DI的mRNA和蛋白水平的检测 21 7 RXRcc磷酸化水平的检测 ．．21 8 THs／TRs靶基因的mRNA水平的检测 ．．22 9甲状腺激素对转基因小鼠肝／体质量比的影响 23 10甲状腺激素对转基因小鼠肝肿瘤总数和不同直径范围内肿瘤个数的影响 ．．．． ．．．．． ．． ． ． ．．． ． ．．． ． ． ．．．．．． 24 1 1 ERK蛋白表达水平及磷酸化水平的变化 26 12 ERK抑制剂对cyclin D1蛋白水平的影响 ．．26 】3 ERK抑制剂对RXRa磷酸化水平的影响 27 (四)讨论 27 (五)结论 31 (六)参考文献 3 l 三、综述 35 (一)综述 35 (二)参考文献 40 四、攻读学位期间发表论文情况 ．．43 五、致谢 44 万方数据 大连医科大学硕士学位论文肝肿瘤促进THs升高及抑制THs抗肿瘤作用的机制 大连医科大学硕士学位论文 肝肿瘤促进THs升高及抑制THs抗肿瘤作用的机制 硕士牛姓名：张敏 指导教师：王福金副教授 专业名称：动物学 摘要 目的：探讨甲状腺激素对Ras癌基因诱导小鼠肝肿瘤发生发展的影响作用。 方法： 1．采集3、5、7、9个月龄的非转基因和H．rasl2V转基因雄鼠的肝组织和 血清样本，统计肝／体质量比，并用酶联免疫法检测血清中总T3、T4水平和游离 T3、T4的水平。 2．提取9个月龄非转基因雄鼠肝组织(Wt)样本以及9个月龄H．ras]2V转 基因雄鼠肝癌组织(T)、肝癌旁组织(P)，经病理确认后，提取总蛋白质和总 RNA；应用蛋白质印迹法检测各组织样本中cyclin D1、p-RXRa、ERK、p-ERK 的蛋白水平；RT-qPCR法检测TBG、Diol、cyclin D1在组织样本中的mRNA水 平。 3．将36只SPF级3个月龄转基因雄鼠按随机数表法分为对照组、甲亢组(饲 喂甲状腺片)、甲减组(饲喂丙硫氧嘧啶片)，每组12只，处理4个月，7个月 龄时采样，检测小鼠血清中总T3和T4水平，统计肝／体质量比、肝肿瘤大小及 数量。 4．将12只SPF级9个月龄H．rasl2V转基因雄鼠按随机数表法分为对照组 和ERK抑制组，每组各6只，采用腹腔注射给药，用ERK抑制剂PDl84352处 理15天，采集肝痛组织(T)和肝癌旁组织(P)，提取总蛋白质和总RNA，检 测抑制剂对cyclin D1和p-RXR蛋白水平的影响。 结果： 1．3、5、7、9个月龄的转基因雄鼠肝／体质量比随月龄的增大逐渐增高，并 显著高于同月龄非转基因雄鼠(P0．01)。酶联免疫法检测血清结果表明，与9 万方数据 大连医科大学硕士学位论文个月龄的非转基因雄鼠相比，同月龄转基因雄鼠血清中总T3和T4水平显著升 大连医科大学硕士学位论文 个月龄的非转基因雄鼠相比，同月龄转基因雄鼠血清中总T3和T4水平显著升 高(P0．01)，但游离T3和T4水平没有显著变化。 2．RT-qPCR检测结果表明，与9个月龄的非转基因雄鼠肝组织及转基因雄鼠 的肝癌旁组织相比，肝癌组织中TBG和cyclin D1的mRNA表达水平显著升高 (P0．05)，Diol的mRNA表达水平显著降低(PO．05)。Western blot结果显 示，与9个月龄的非转基因雄鼠肝组织及转基因雄鼠的肝癌旁组织相比，肝癌组 织中cyclin D1、p-RXRa、ERK、p-ERK的蛋白水平均显著升高。 3．甲状腺片(甲亢组)和甲硫咪唑(甲减组)处理