离心法增加HaCaT细胞的基因转染效率.pdf

网络出版时间：2018-05-30 10:10:57 网络出版地址：/kcms/detail/31.2035.Q1010.002.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2018, 40(6): DOI: 10.11844/cj cb.2018.06.0028 离心法增加HaCaT细胞的基因转染效率 1 1 1* 2* 徐云飞 孟莎莎 周卫辉 李红梅 1 ( 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室, 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地; 2重庆医科大学附属儿童医院皮肤科, 重庆400014) 摘要 HaCaT细胞是自发性的人永生化表皮细胞株, 常用于皮肤功能与疾病的相关研究, 但 常规脂质体法转染该细胞的效率极低。该研究主要探讨离心是否能够增加脂质体法转染HaCaT细 胞的效率。以Lipofectamine® 2000为脂质体转染试剂, pEGFP-C1为质粒转染HaCaT细胞后分别使 用常规法和离心法处理, 利用荧光倒置显微镜和流式细胞仪测定转染效率; 细胞增殖活力实验检测 离心是否对细胞活力产生影响; 荧光素酶报告基因、Western blot 实验检测离心法实际效应对目的 基因表达的影响。结果表明, 离心法处理组所测得的转染效率均高于常规法处理组, 差异有统计学 意义。荧光素酶报告基因实验、Western blot 实验则进一步证实了转染后离心的性价效应能增加目 的基因的表达, 具有较高的实用性。综上所述, 常规转染步骤后离心能够增加HaCaT细胞的基因转 染效率。 关键词 离心; 转染效率; HaCaT细胞 Centrifugation Increases the Gene Transfection Efficiency of HaCaT Cells 1 1 1*, Li Hongmei2 * Xu Yunfei , Meng Shasha , Zhou Weihui 1 ’ ( Pediatric Research Institute, Children s Hospital of Chongqing Medical University, Ministry of Education Key Laboratory of Child Development and Disorders, Chongqing Key Laboratory of Translational Medical Research in Cognitive Development and Learning and Memory Disorders, China International