生物化学课件-酶化学.pptVIP

* 二、酶的分离与提纯 1．选材 2．破碎细胞 3．抽提 4．去核酸、去多糖 5．提纯 6．保存 * 由于酶的特殊性，在提纯过程中要注意 : 1．全部操作在低温0～4℃。 2．在分离提纯过程中，不能剧烈搅拌。 3．在提纯溶剂中加一些保护剂，如少量EDTA、 少量β-巯基乙醇。 4．在分离提纯过程中要不断测定酶活力和蛋白质浓 度，从而求得比活力，还要计算总活力。 * 酶的纯度鉴定（p258） 每次比活力 纯化倍数= ——————— 第一次比活力 每次总活力 回收率= ———————x100% 第一次总活力 * 第五节 酶工程及酶的应用 主要研究酶的生产、纯化、固定化技术、酶分子结构的修饰和改造及在工农业、医药卫生和理论研究等方面的应用。 1、化学酶工程（初级酶工程） 是指天然酶、化学修饰酶、固定化学酶及人工模拟酶的研究和应用。 2、生物酶工程(高级酶工程) 是酶学和以DNA重组技术为主的现代分子生物学技术相结合的产物， 一、酶工程 * （1）天然酶 （2）化学修饰酶 ①化学修饰酶的功能基 ②交联反应 ③大分子修饰作用 （3）固定化酶 1、化学酶工程 * 固定化酶的制备 ① 吸附法 * ②包埋法 * ③ 结合法 * ④ 交联法 * （4）人工模拟酶（p266） * 二、酶的应用（p267） * 作业 1、什么是酶？酶与一般非酶蛋白质和无机催化剂有何区别？ 2、酶有几大类？每类的典型功用为何？ 3、试说明酶的催化的高效机制？ 4、竞争性抑制与非竞争性抑制的不同点是什么？ 5、何为酶的专一性？酶的专一性有几类（举例说明）如何解释酶作用的专一性？ 6、当某一酶促反应的速度从最大速度的10%提高到90%时，其底物浓度要作多少的改变？ * * * * * * * * * * 2．V与[E] 关系的几点讨论 * 七、激活剂对酶反应速度的影响 什么是激活剂（activator）? 酶的激活剂：凡能提高酶活性的简单化合物。 1. 无机离子 （1）一些金属离子，如Na+、K+、Mg2+、Ca2+、 Cu2+、Zn2+、Fe2+等。 ① 专一性 ② 有的金属离子可以互相替代 ③ 有的离子间有拮抗作用 （2）阴离子：如Cl-、Br-、I-、CN- 等 （3）氢离子 * 2. 有机分子 3. 具有蛋白质性质的大分子，如酶原可被一些蛋白酶激活，蛋白酶可看作为激活剂。 （2）金属螯合剂EDTA（乙二胺四乙酸） （1）某些还原剂如Cys、GSH等 * 什么是抑制作用（inhibition）? 酶在不变性的情况下，由于必需基团或活性中心化学性质的改变而引起酶活性的降低或丧失。 抑制剂—凡阻抑酶反应速率的化合物。 八、酶的抑制作用和抑制作用动力学 * 例如： DFP对胰凝乳蛋白酶的抑制 1、不可逆抑制作用 E+I→EI * （1）竞争性抑制作用（competitive inhibition） E+I EI 2、可逆抑制作用及其动力学 * 例: 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 * ① 竞争性抑制作用动力学方程的推导 EI+S → no reaction 推导出的方程 * ② 竞争性抑制作用动力学方程的讨论 A、与标准米氏方程比较 B、当[ I ]→0时，方程还原成米氏方程。 [ I ]→∞时， * C、取方程的倒数，进行双倒数作图 * a. 竞争性抑制剂往往是酶的底物类似物或反应产物； b. 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同； c.抑制剂浓度越大，则抑制作用越大；但增加底物浓度可使抑制程度减小； d.动力学参数：Km值增大，Vm值不变。 D.竞争性抑制的特点： * （2）非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibition） E+S →ES ESI E+I → EI ESI * ① 非竞争性抑制作用动力学公式推导 经推导后得方程 : * ② 非竞争性抑制作用动力学方程讨论 A、与米氏方程比较 B、 当[I]→0 [I]→∞ * C、取方程倒数，进行双倒数作图 * a.非竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； b.底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合； c.抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响； d.动力学参数：Km值不变，Vm值降低。 D.非竞争性抑制