《SNT1059.1-2002-进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法》.pdfVIP

进 出口食品中沙 门氏菌 滤膜筛选法 Salmonella in food for import and export— Membrame filter screening method SN/T1059.1— 2002 前 言 本标准是按照GB/T 1.1— 1993 《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》进行编写的。 本标准中沙门氏菌滤膜筛选法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会 (AOAC) 《公定分析方法》(1995年第16版 17.9.09)样品制备，采用SN 0170— 1992 《出口食品沙门氏菌属 (包括亚利桑那菌)检验方法》，并在实验的基础上编写而成。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。 本标准首次发布。 1 范围 本标准规定了进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法。 本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、牛奶、饮料、禽肉、椒粒中沙门氏菌筛选。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的 各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 SN 0170— 1992出口食品沙门氏菌属 (包括亚利桑那菌)检验方法 SN 0330— 1994出口食品中微生物学检验通则 3抽样 按SN 0330规定执行。 4 试验方法 4.1 方法原理 将滤膜放入滤器，过滤样品。由于滤膜的作用而使沙门氏菌保留在膜表面上。将滤膜放在EF-18培养基上培养，沙门氏菌形成绿色、蓝绿色、蓝 色或黄色菌落。 4.2 设备和材料 4.2.1 滤器：一套，备有预滤器。 4.2.2 真空泵。 μ 4.2.3 滤膜：有机或水相，孔径0.45 m。 4.2.4 培养箱：36℃± 1℃，42℃± 1℃。 4.2.5 水浴箱：45℃± 1℃，37℃± 1℃。 4.2.6 吸管：1 mL、10 mL，具刻度。 4.2.7 玻璃三角瓶和广口瓶：250 mL、500 mL。 4.2.8 试管：17 mm× 170 mm，玻璃制。 4.2.9 玻璃珠：直径5 mm。 4.2.10 平皿：直径90 mm。 4.2.11 天平：感量0.1 g。 4.2.12 均质器。 4.3 培养基和试剂 4.3.1 蛋白胨-吐温80(PT)稀释液 (见附录A A1)。 4.3.2 四硫磺酸盐肉汤(加碘和煌绿)(见附录A A2)。 4.3.3 EF-18琼脂 (见附录A A3)。 4.4 样品制备及增菌培养 4.4.1 如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15 min，或在2℃～5℃不超过18 h解冻。若不能及时检验，应置于-15℃左右保存。非冷冻而易腐的食 品，置于4℃冰箱保存。 4.4.2 以无菌操作，称取25 g(mL)样品，置于灭菌均质杯内，加入25 mL PT稀释液，以8 000～ 10 000 r/min 均质1 min，放入装有200 mL PT稀 释液的500 mL灭菌广口瓶，混合均匀，如pH低于6.6，用灭菌1 mol/L氢氧化钠溶液，调pH至6.8± 0.2，放入37℃水浴培养4 h(以增菌液达到37℃时算 起)，进行前增菌；其后，移取10 mL转种于盛有100 mL四硫磺酸盐肉汤 (加碘和煌绿)的250 mL灭菌广口瓶内，摇匀，42℃± 1℃培养20 h± 2 h，进 行选择性增菌。 4.5 过滤和培养 将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10 mL～20 mL无菌蒸馏水于 滤器中，用灭菌吸管取选择性增菌液1 mL放入滤器中，打开真空泵抽吸液体。再加入10 mL～15 mL无菌蒸馏水抽取液体，抽干后关闭真空泵，打开底 座夹，以无菌镊子取出滤膜，将滤膜移至预先干燥好EF 18琼脂平板表面上，滤膜与琼脂表面之间应无