《SNT1059.2-2002-进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数滤膜_MUG法》.pdfVIP

进 出口食品中大 肠菌群、大 肠杆菌计数滤膜/MUG 法 Total coliform and escherichia coli counts in food for import and export— Membrane filter/MUG method SN/T1059.2— 2002 前 言 本标准是按照GB/T 1.1— 1993 《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》进行编写的。其中大肠菌群、 大肠杆菌计数滤膜/MUG法的培养基、培养温度和滤膜法等内容，是参考美国公职分析化学家协会 (AOAC) 《公定分析方法》(1995年第16版17.3.09)， 结合SN 0169— 1992 《出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》中样品制备并在实验的基础上编写的。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。 本标准起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。 本标准首次发布。 1 范围 本标准规定了进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数滤膜/MUG法。 本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、饮料、椒粒、牛奶 (需用蛋白酶处理)中大肠菌群、大肠杆菌的计数滤膜/MUG法检 验。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的 各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 SN 0330— 1994出口食品中微生物学检验通则 3 抽样 按SN 0330规定执行。 4 检验方法 4.1 方法原理 将滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用，大肠菌群、大肠杆菌保留在膜表面。大肠菌群在乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸 (LMG)琼脂平板上经培 β 养后产生蓝色菌落。大肠杆菌经培养后产生的葡萄糖苷能降解荧光底物4 甲基伞形酮 D葡萄糖苷酸 (MUG)并释放4 甲基伞形酮荧光物质，在波 长366 nm长波紫外光 (UV)灯下MUG阳性菌落呈蓝白色荧光。 4.2 设备和材料 4.2.1 滤器：一套，备有预滤器。 4.2.2 真空泵。 4.2.3 长波紫外光 (UV)灯：波长366 nm。 μ 4.2.4 滤膜：有机或水相，孔径0.45 m。 4.2.5 培养箱：36℃± 1℃。 4.2.6 水浴箱：45℃± 1℃。 4.2.7 吸管：1mL、10mL，具刻度。 4.2.8 玻璃三角瓶和广口瓶：500mL。 4.2.9 试管：17 mm× 170 mm，玻璃制。 4.2.10 玻璃珠：直径5 mm。 4.2.11 平皿：直径90 mm。 4.2.12 天平：感量0.1 g。 4.2.13 均质器。 4.2.14 乳钵和研棒。 4.3 培养基和试剂 4.3.1 蛋白胨-吐温80(PT)稀释液 (见附录A A1)。 4.3.2 乳糖莫能霉素葡萄糖酸琼脂 (LMG)(见附录A A2)。 4.3.3 缓冲MUG琼脂 (BMA)(见附录A A3)。 4.3.4 三 (羟甲基)胺甲烷 (Tris)缓冲剂 (见附录A A4)。 4.3.5 胰蛋白酶贮存液 (见附录A A5)。 4.4 样品制备 4.4.1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75%乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的 食品，应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2℃～5℃18 h内解冻，或在45℃以下15 min内解冻。 4.4.2 样品匀液的制备 4.4.2.1 液体食品 以灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL PT稀释液的500mL灭菌广口瓶 (瓶内预置适当数量的玻璃珠)，以80 cm幅度、于7 s内振摇25次(或以机 械振荡器振摇