表达禽流感病毒h7亚型ha基因的禽痘重组病毒的构建及其免疫效力的评估预防兽医学专业论文.docxVIP

摘要禽流感(Avian 摘要 禽流感(Avian Influenza，AI)是由A型流感病毒引起的禽类的感染和威疾病综合征，广泛流行 于世界上许多国家和地区，给养禽业造成了巨大的经济损失。高致病力禽流感(Im触)多以突然发 病和高死亡率为主要特征，常常导致感染鸡群的全群覆没，被国际兽疫局列为A类烈性传染病。近 几年来，在我国的一些地区也相继出现了舢的流行，1997香港禽流感直接传播给人并致人死亡事件 的发生，更加突出了AIV的公共卫生学意义。目前，H5亚型高致病性禽流感成为研究的焦点，而H7 亚型高致病性禽流感的研究报道较少，其相关的生物制品比较匮乏。虽然近年来H7型未出现大规模 的流行，但禽流感不同亚型的流行变幻莫测，本研究构建的H7亚型重组禽痘活载体疫苗将为我国H7 亚型高致病性禽流感的防治提供物质储备和技术支持。 本研究将我国H7亚型禽流感分离株A／Chicken／Hebei／I／02(H7N2)的HA基因克隆到pSV538质 粒上，把含有禽痘病毒启动子P11的Lacz基因克隆到质粒pSY538．HAl拘Smal位点，然后切下同时含 有HA和LacZ基因的片段再克隆到禽痘病毒载体pSY681的Nofl位点，构建出禽痘病毒转移载 pSY681．HA7．LaeZ。将重组质粒与亲本禽痘病毒S．FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞，进行同源重组， 通过加入x．gal进行阳性重组病毒的筛选、纯化，获得了遗传性状稳定的表达H7亚型HA基因的重组 禽痘病毒rFPV-H7HA。提取重组病毒的总Dl、“进行PCR扩增，获得了1．7kb的携带有外源目的基因片 段，证明所获得的重组病毒携带有外源目的基因片段；Western blot检测结果表明：重组痘病毒能在 体外的CEF细胞有效表达HA糖蛋白。 分别用106、lO、102的PFU剂量的重组病毒rFPV-HTI-IB免疫4周龄SP鹂，4周后分别用IOOLD∞ 的HPAIV A／FPV／Rostock／34(tt7N1)鼻腔途径进行攻击，观察发病与死亡情况，分别于攻毒后第3、5、 7天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况，同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血 清HI抗体、AGP抗体的动态变化，对重组病毒的免疫保护效果进行全面评估。结果，不同剂量的重 组病毒免疫后均可诱导出较高水平的HI抗体，抗体效价在免疫后可达至JJ6192，而且其AGP抗体均为阴 性；在病毒攻击后免疫鸡无一发病和死亡，攻毒保护率为100％，病毒分离和滴定结果显示所有免疫 鸡没有发生排毒；而对照组全部发病并在攻毒后3．8天相继死亡，发病率和死亡率均为100％，并在其 泻殖腔和喉头拭子中均分离到了较高滴度的病毒。本试验研究结果表明，稳定高效表达我国H7亚型 禽流感分离株A／Chicken／Hebei／I／02(H7N2)HA基因的重组禽痘病毒rFPV-H7HA能有效诱导机体 的体液免疫反应，可以对1-17亚型高致病性病毒的攻击产生100％的免疫保护，此重组活载体疫苗可 为我国1-17亚型高致病性禽流感的防制提供必要和有效的物质技术储备。 关键词：禽流感；H7亚型；}L气基因；重组禽痘病毒 AbstractAvian Abstract Avian influenza(AI)is an infection and／or disease syndrome caused by type A influenza virus．It is widespread in many countries and areas throughout the world,and of great economic losses in poultry industry．The great characteristic ofthe highly pathogenic avian influenza(HPAI)is high mortality,and it is classified A virulent infectious disease by 0．I．E．In China,．HSNI subtype of AIV infected human directly, especially caused them dead，which Was the fnst time that AIV overacrossed interspecies barrier and infected human．H5 subtypes highly pathogenic avian influenza virus(HPAIV)becomes the big issue ofthe current research．There are few of reports ab