富含半胱氨酸蛋白stecrisp的结构和功能研究及dsif转录延伸因子复合物spt4spt5ngn结构域的结构研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

中国科学技术大学博上论文 中国科学技术大学博上论文 摘要 摘 要 1．Stecrisp的结构和功能研究 CRISP(富含半胱氨酸分泌蛋白)家族具有与精卵融合，先天宿主免疫和离子通道抑制等多种 不同的功能。我们从皖南竹叶青(Trimeresurusstejnegeri)蛇毒中分离纯化了一种新的蛋白， 并确认了它是CRISP家族中的一个成员。为更好的了解CRISP蛋白的功能性质，我们首次解 析了stecrisp 1．6 A分辨率的晶体结构。Stecrisp的结构由三个部分组成：N一端的 PR-1(pathogenesis—related proteins ofgroupl)结构域，中间的铰链区和C一端的富含半胱氨酸 结构域(CRD)。PR．1结构域中的溶剂暴露残基(His60，Glu75．Glu96，Hisll5)与同源结构 中的构象非常相似，暗示他们可能具有某些共同的分子机制。PR．1结构域中围绕可能的活性 中心的三段高度可变的柔性loop与其同源结构明显不同，表明stecrisp在识别和催化过程中 存在大的种属和底物特异的分化。而酶活性实验的负结果进一步支持这一观点。铰链区通过 C一端区域中特征性的10个半胱氨酸残基中的四个形成交叉的二硫键，对于稳定N一端PR一1结 构域有重要作用。空间上远离PR．1结构域的CRD结构域具有‘个类似与两种K+一通道抑制剂 (Bgk，Shk)的折叠类型。几个可能的功能位点位于CRD结构域的一段溶剂暴露的loop上。 Stecrisp的结构解析为进一步研究CRISP家族不同成员的功能机理提供了一个结构原型。 2．转录延伸因子复合物DSIF的结构研究 DSIF是真核细胞中调控许多基因表达的一种普遍的转录延伸因子。它由spt4和spt5两个亚 基组成。在体外，DSIF作为一个负延伸因子增加RNAP|I的暂停：在体内它则可以促进延伸。 DSIF与RNAP|I紧密结合，而且与其他许多因子存在遗传的和直接的相互作用，这些相互作 用包括TFIIS，TFIIF，CSB，和染色质有关的因子spt6，FACT,Chdl，PAF，以及与mRNA成熟 和监督有关的因子。我们首次解析了酵母中spH和spt5一NGN结构域的复合物结构。复合物 中亚基之I、日J通过一种延长的B一片层的方式以疏水界面结合在一起。与这一相互作用相关的残 基在古细菌的同源蛋白中也是严格保守的，这可能暗示在进化过程中的这一复合物是一直存在 的。在将大部分与复合物内部相互作用有关的残基排除掉以后，DSIF复合物中与转录调控功 能直接相关的其他残基被更加清晰的描绘出来。有关它们可能作用的进一步探索『F在进行中。 spt4--spt5一NGN复合物结构的解析为深入了解spt4一spt5的调节转录机理奠定了重要的结构 基础。 关键字：Stecrisp，Crisp，富含半胱氨酸分泌蛋白，PR一1，DSlK spt4，spt5，转录延伸，晶体学， 摘要 iIi 中国科学技术人学博十论文 中国科学技术人学博十论文 摘要 Abstract 1。The crystal structure and functions of cystein-rich secretory protein Stecrisp CRISP，a family of cysteine—rich secretory proteins，have various functions related to the sperm-egg fusion．innate host defense and blockage of ion channels We purified a novel protein．Stecrisp，from Trimeresurus stejnegeri snake venom，and identified it to be a member of CRISP,Towards a better understanding of the functional details of CRISPs，we solved the crystal structure of stecrisp refined to 1．6 A resolution It shows stecrisp contains 3 regions：a PR一1(pathogenesis·related proteins of groupl)domain，a hinge and a cysteine—rich domain(CRD)．Similar conformation of solvent exposed and conserved residues(His60，Glu75，Glu96，Hisl 1 5)in PR一1