衰老的脐带间充质干细胞生物学特性与基因表达谱的分析研究.pdf

究 表型 2检测人脐带问充质十细胞体外培养衰老过程巾基因表达谱的改变井探讨 其可能的机制。 方法 l细胞培葬：用组尊l块贴擘法培养人脐带|1lJ克质干细胞．取第3代细胞作为 对照组，连续培养到第15代的细胞为衰老组，倒胃显微镜下观察细胞形态，并分 刖制成细胞爬片扫描电镜观察并拍照。 2生k增髓；分别取对照组和衰老鳃细胞，接种1：96fL培养板巾．备设8 复孔，培养6天。每同检测在450rim波长处删吸光值(OD值)．绘制细胞牛长曲 线。 3．表型检测：对照组和衰老组细胞消化后充分吹打成单细胞悬液，使用流 式细胞仪检测并分析两组细胞CD34、CD45、CD44和CDl05等表型变化。 4．诱导分化能力牲定：将对照纰和衰老组细胞置于不Ⅲ的诱导培养液中向 成骨细胞及成脂细胞诱导分化，诱导分化14天后，进行同定，并分别进行相应的 染色观察诱导分化差异。 5基凼表达潜分析：细胞洗涤后加八Trizol试制，提嫩总RNA，进行基因表 达{{孥芯片杂交、枪删和数捌分析．肝用DNA芯”H拙仪行微阶列_|I_I描。将¨描 而衰老组细胞伪足增多，整体扁平。 2．增殖情况：对照组和褒老组‘I＆曲线在接种后都有一个停滞期(12—24小 If,J)，然后进入增嫡期．对照组细胞能更快的进入增精期，井在第5灭达到更高 的细胞数量后进入平台明。而衰老组停滞期长，进入增殖期后第3无进入甲台期t 最终的细胞数量也少。 3表型榆测；根据流式细胞仪检测结果，It照纰和衰老组细胞CD34和CD45 均为阴性表达， CD44和CDl05均为高表达，组削阳性率表达井无显著差异。 4分化能力：在适叶的分化条件诱导下．对照组和衰老组细胞均能向成骨和 脂肪细胞分化：向成骨细胞诱导14天后大部分细胞}}j现钙化胞外基质，茜素红 S染色阳性碱性磷酸酶染色阳性：向脂胁细胞诱导分化14天后约50％的纲胞内 出现油红O阳性脂肪颗粒。这些结果证明所获得的贴壁细胞符合问充质干细胞 的特征．与对照组细胞相比，衰老组细胞诱导分化能力显著降低。 5差异基因信号通路及基因聚类分析：将衰老组细胞与对照组差异表达的基 因进行KEGG 05)．可见衰老纽显著上调通路有20荣，其 pathway分析(口0 中包括自身免痤痛、退行性疾病相关通路，r调通路49条，涉及通路包括合成 代谢、细胞外基质、物质代谢和细胞增殖等。对41000+条旌冈进行榆洲，差异 基因多达8000个，对硅若差异的2000个基I司进行聚类分析，罹示差异基冈涉及 堪行性相关幕因表达明显上调。 关键词脐带阃充质干细胞；衰老：基因表达：信号通路。 objectives： humanumbilicalcord 1 Toobserveand the ofinvittcultured investigatechanges stem the of mesenchymalcells(hUC-MSCs)illprocess anddifferentiation growthdynamics capacity； 2To thedifferent of andoldhUC—MSCs profilesyoung explore geneexpression anddiscussthe possiblemechanisms Methods： isolatedfromhumanumbilicalcordattachment l Cellculture：hUC—MSCswere