《SNT116 4.1-2002-牛传染性鼻气管炎病毒分离操作规程》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标 SN/T 1164.1-2002 牛传染性鼻气管炎病毒分离操作规程 Protocolofvirusisolationforinfectiousbovinerhinotracheitis 2002一11一25发布 2003一05一01实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总 局 发 布 SN/T 1164.1-2002 前 言 本标准的试验方法是参考国际兽疫局 诊《断试验和疫苗标准手册》介绍的方法，并经过长期实践、改 进，使之进一步具体化，而形成现行的标准。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:苏卫、张晓丁、王涛、李凌枫。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1164.1-2002 牛传染性鼻气管炎病毒分离操作规程 1 范围 本标准规定了牛传染性鼻气管炎病毒分离方法。 本标准适用于牛传染性鼻气管炎病毒的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准.然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 (neqISO 3696:1987) 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 3.1 TCIDSo 半数组织培养感染量 。 3.2 IBR 牛传染性鼻气管炎 。 3.3 M DBK 牛 肾传代 细胞系 。 4 原理 牛传染性鼻气管炎((IBR)是牛的急性传染性疾病。患牛康复后仍可长期带毒。感染IBR病毒的公 牛，精液中可能含有病毒。通过对采集病料的检测，以确定是否带有病毒。 5 试剂和材料 5.1 标准阳性血清，阴性血清，由指定单位提供。 5.2 培养液:配制见附录A, 5-3 细胞分散液:见附录A, 5.4 100刃,500川 微量可调移液器，无菌塑料滴头。 5.5 无菌6孔、24孔细胞培养板。 5.6 无菌棉拭子:5mL-10mL无菌玻璃试管。 5.7 本标准所用水应符合GB/T6682-1992中一级水的规格。 5.8 样 品 5.8.1 呼吸道样品:用灭菌棉拭子伸人鼻道采取分泌物，放人含青霉素 1000IU/m,l,链霉素 1000pg/mL,pH7.2的Earles液瓶中。也可用棉拭子采集眼分泌物放人Earle液中。 5.8.2 阴道样 品:用棉拭子采取脓疙性外 阴阴道炎早期病变时的阴道粘液，放人含青霉素 1000IU/ml，链霉素1000pg/mI_,pH7.2Earle液的瓶中。 SN/T 1164.1-2002 5.日.3脑组织样品:在剖检时无菌采集脑组织样品。 5.8.4 流产胎儿组织样品:刚死亡的胎儿，立即无菌采集肺、’肾、脾等各种组织样品，放人含青霉素 1000IU/mL，链霉素1000Fg/mL,pH7.2Earle液的瓶中，或吸取胸水. 5.8.5血清样品:常规无菌采血分离血清。 5.8.6 精液样品:采集新鲜精液或抽取冷冻精液管。 6 器械和设备 6.1 冰箱、冰柜。 6.2 二氧化碳培养箱。 6.3 离心机。 6.4 超声波裂解器。 6.5 倒置显微镜。 6.60.45Fpm滤器。 7 试验方法 7.1 样品运输 采集的样品应