《SNT116 4.2-2003-牛传染性鼻气管炎微量血清中和试验操作规程》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1164.2-2003 牛传染性鼻气管炎微量血清中和试验 操 作 规 程 Protocolofmicro-serum neutralizationtestfor infectiousbovinerhinotracheitis 2003-03-17发布 2003-09-01实施 中 华 人 民 共 和 国 国家 质 量 监 督 检 验检 疫总 局 SN/T1164.2-2003 H1i 舀 本标准的试验方法是参考国际兽疫局(OIE)《诊断试验和疫苗标准手册》介绍的方法，并经过长期 实践、改进，使之进一步具体化，而形成现行的标准。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:苏卫、张晓丁、王涛、李凌枫。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T1164.2-2003 牛传染性鼻气管炎微tI血清中和试验 操 作 规 程 范围 本标准规定了牛传染性鼻气管炎微量血清中和试验方法。 本标准适用于牛传染性鼻气管炎病毒抗体的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 3 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 CPE 致细胞病变作用 。 3.2 TCIDso 半数组织培养感染量 . 3.3 IBR 牛传染性鼻气管炎 。 原理 动物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，从而阻止 病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵人，使病毒失去感染力。微量血清中和试验是在微量细胞培养板 上，用已知标准病毒株测定未知血清抗体。当相应的抗原抗体发生中和反应后，阻止了已知病毒对敏感 细胞的侵袭，从而细胞不出现病变。 5 试剂和材料 5.1 本标准所用水应符合GB/T6682-1992中一级水的规定。 5.2 本标准所用溶液配制见附录A, 5.3 IBR标准毒株(Baitha-Nu/67冻干毒或其他标准毒株)和标准阳性、阴性血清(由指定单位提供)。 5.4 细胞:使用MDBK细胞或三代以内体外培养的未感染 IBR病毒的胎牛肾细胞(BK),皋丸细胞 (BT)，细胞浓度约为3X10s/ml.,BK或BT细胞的制备:无菌采取初生犊牛肾或架丸，磨碎或剪碎，再 I SN/T1164.2-2003 用胰蛋白酶消化制备细胞，置37℃二氧化碳培养箱，长成良好单层备用。 5.5 被检血清:用无菌注射器或采血专用真空管针无菌自牛静脉采血，无菌分离血清编号后备用。本 方法使用的阳性血清、阴性血清和被检血清须经56C30min处理。 6 器械和设备 6，飞 倒置光学显微镜。 6.2 二氧化碳培养箱。 6.3 冰箱(一20C保存血清，一70℃保存种毒)。 6.4 无菌96孔细胞培养