扁桃酸消旋酶催化效率的预测与改造生物化工专业论文.docxVIP

Prediction Prediction of the catalvtic emciencv of Author’S signature： Supervisor’s signature： Thesis reviewer l： Thesis reviewer 2： Thesis reviewer 3： 乃esis reviewer 4． Thesis reviewer 5： Chak： (Cotmnittee of oral defence) Committeeman l： Committeeman 2： Committeeman 3： Committeeman 4． ●-_●__-_●--__--____--_●-●-●__l--______-_-_--●_-___●-_-_-__●●___-●-●_lll__--_-_________一 Committeeman 5： Date of-oral defence： Ⅱ 浙汪大学硕l：学位沦文 浙汪大学硕l：学位沦文 独创怜声明 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文r}·特别加以标注和致谢的地方外，论文r{t不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝望盘茎或其他教疗机 构的学位或证书而使倒过的材料。与我 。同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均已在论文中作了明确的说明弗表示谢意。 学位论文作者簇名： 签字目期： 年 月 园 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝姿盘鲎有关保留、使Jlj学位论文的规定， 有权保留并向嘲家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被瓷测和 借阅。本人授权逝姿盘堂可以将学彼论文的全郝或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采刚影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适，驰本授权书) 学位论文作者链名： 蟹师签彩： 链字目期： 年 月 日 签字髓期： 年 月 日 学位论文作者毕业质去向： 二【作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： Ⅲ 浙江大学颟l二学使论文 浙江大学颟l二学使论文 敦 落 致 谢 本课题是在我的导师于洪巍教授的悉心指导下完成的。从开始选定研究方向 到最后成果发表的过程中，于老师始终如一的关心与指导，令人敬佩的热忱与激 情，感人至深的安慰和鼓励，无不让我历历在嚣，铭记在心。子老师认真的科研 态度，严谨的教学作风以及对学生的严格要求使我的实验技能与学术水平在硕士 期阍有了很大的进步与提高，使我受益良多。面我从他身上学到的刻营努力，踏 实肯予和不折不挠的精神也对我今后的个人发展起到了重要作用。他努力为我们 提供的国际化环境和机会，使褥我在英语口语和写作等方面都受益匪浅。 感谢刘击师兄在分子模拟方面给予我的认真指导，帮助我解决了许多入门时 的疑惑，并在我所发表的论文的写作与修改上提供许多了宝贵建议和意见。 感谢一童在我身边路伴我的任钢锋，不论发生什么都能理解我、帮助我。感 谢王珏师妹，与我讨论实验方法，帮助我解决了实验中的关键问题。另外，还要 感谢汤晓玲师姐、王博师兄，刘敏、麻静波、顾佳黎，陆文强、王丹等，感谢你 们一同营造的良好的实验室氛围，佯我度过了一段愉快且有意义的科研生活。感 谢我的室友王红寅和闻志强，在学习生活上对我的关心，提供了良好的寝室氛围。 感谢张贤安，林伟蜂、张娟等同学与我交流实验心褥与体会，共同进步。最后， 我感谢我父亲母亲等家人对我的支持和关爱! 梅卓航 2011年1月11日 IV . 浙江大学顾jj学位沦文 浙江大学顾jj学位沦文 摘爱 摘 要 扁桃酸消旋酶(maade协eracemase，MR)(Ec 5．1．2．2)能在M矿辅助下催 亿l，l一质子转移及应，使扁桃酸等手性化合物的一个单体转化为另一个单体。它 在生物转化法产苯乙酮酸和手性化合物动态动力学拆分中都具有广阑的应用性。 本文首先从恶安假单胞菌中提取了扁桃酸消旋酶的基因，并利用分子生物学手段 完成了包含扁桃酸消旋酶基因的重组质粒的构建。在诱导表达和纯化后测定了其 比活为32．3U／mg。 在得到野生型扁桃酸消旋簿克隆的基础上，以其重组质粒为横版，利用改良 后的一步法PCR定点突变策略成功构建了突变体V22P,．，并对它进行了诱导表 达、纯化以及酶活的测定。结果表喷，突变体比活为7．SU／mg，是野生型的24．1％。 从分子层面对该突变体活性下降进行了机理性解释，认为其主要原因不是突变后 第22位氟基酸侧链空闻位陧的改变，而是：1)突变后极幢基团的引入降低了疆 袋结构的疏水性，减弱了它与瘾物苯环的巯水作用力，从而影响酶与底物的正常 结合；2)第22位氮基酸处于苯环附近，靠近带有部分正电荷的q碳原子两远离 带负电荷的氧