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博士举位论文 博士举位论文 不同生理条件下两种纤毛斑缃脆静比较研究 不同生理状态下两种纤毛虫细胞的比较研究 专业： 动物学 獗究方向：动物细胞生物学 博士生： 陈季武 导师： 顾福康教授 摘要 纤毛虫中经常发生形成包囊和脱包囊的过程，期闼，缨胞结构经历了不同水 平的分化鄹羹组，细胞内发生了一系列生理生化变化。舄裁，对纤毛虫包囊现象 的研究不仅是探讨真核细胞的缝孝句与功能、细胞模式形成和控制机理的一个蓖要 方话，并已成为揭示细胞予特殊生理条件下生命活动规律及其细胞在不简水平调 控的～个重要内容。对包囊现象的研究在细胞及脆器水平己经积累了大量的赘 料，但从生物化学和分子水平上的工作划刚开始，所冕报道蹇少。本文以形成 “毛基体吸收型包囊”的膜状急纤蛊和形成“毛基体非吸收型包囊”的包囊游l} 虫的休眠包囊和营养绍服为材料，应用多项生物学技术，从细胞水平、酶水乎、 基因水平对大桉DNA、线粒体DNA、全蛋皂质组成和等迫点、包囊壁磺臼质组 成、网工酶组成和活性、能量代谢以及抗氧化能力等进行了比较研究，实验结果 和结论如下： 一．大核DINA和绞粒律DNA的RAID 应用RAPD技术对急纾虫、游仆虫休眠包囊和营养细胞大核DNA、线粒体 DNA进行了眈较研究。结榘表明，利用35条隧枧引物，游朴虫大核DNA共扩 增出220条片段，其中以林眠铝囊大核DNA奠模板扩增出97条片段，以营养细 胞太核DNA为模板扩增出123条片段，两者鸯79条共享片段，共事度为72％； 体眠包囊大投D毗A扩增出18条特异性片段，营养细胞大核DNA扩增出44条特 异性片段，两嚣存在28％的差舅。剩用34条随机gf物，急纤虫大核DNA共扩增 出203条片段，其中以休眠包囊大核DNA为模板扩增岛106条片段，黻营养细 胞大孩DNA为模板扩增出97条片段，两者有6l条共享片段，共享度为60％： 休眠包囊大核DNA扩增出45条特异性片段，营养细飘大核馘A扩增出36条特 异性片段，两者存在40％的差异。这些结果表明，急纤虫体眠包囊瓤薷券绍胞选 择性表达的大核基因在很大程度上是一致螅，但也存在差巽。游lp虫体眠包囊与 营筹细胞选择性表达的大核基因也是如此。这些差异提示，游lp虫和惫纤虫休眠 博士学莅论文 博士学莅论文 不同生理条件下两种纤毛垒绍胞的比较研究 包囊大核DNA的基因表达与营养细胞并不完全一致，且在菜些方面可能发生明 显的变化，这些变化与细胞在营养状态下酌代游活动等囱相对静止状态的剧烈变 化以及休眠的生理生化变化密切相关。相似地，利用32祭随机gl物，游4}虫线 粒体DNA扩增出154条片段，篡中以体眠包囊线粒体DNA为模板扩增出74条 片段，以营葬缨胞线粒体DNA为横投扩增出80条片段，两者有s5条共享片 段，共亭度为71％；体眠包囊线粒体DNA扩增出19祭特弹性片段，营养细胞线 粒体DNA扩增如25条特异性片段，两者有29％的差异。利用34条随棍弓{物， 慧纤虫线粒体DNA扩增出216条片段，其中以林S民镪囊线粒体DNA为模板扩增 出102条片段，以营养细胞线粒体DNA为模校势。增出114条片段，两者有67基 共享片段，共享度为62％；体眠包囊线歉体DNA扩增出35条特冥性片段，营箨 细胞线粒体DNA扩增出47条特异性片段，两者存在38％的差异。这些结果表 明，急纤虫体眠包囊和营养细胞的选择健表这的线牧体基国在很大程度上是一致 的，但也存在差异。游lp虫休眠包囊和营养细胞的选择性表达的线粒体基因也是 如此。这些菱髯旋示，在包囊形成过程中。游仆蛊和急纤盛线粒体DNA的基因 表达都发生了相应的交化，这些变化与包囊形成及其林目民状态下对能量的需求密 切相关。 所得结果表踞，与营养细胞相比，两种休眠包囊的大核DNA莘口线粒馋DNA 表达均发生了变化，但聪种包囊的DNA变化程度有差异，急纾虫休眠钮囊的变 化更大。这可能悬由于急纡虫形成“逗基体吸收型包囊”时全部吸收了毛基 体、纤毛籽和微管结构，在细胞结构发生一系列尉烈交化的同时，越细胞调控作 用的基因组DNA的功能活动变化(例如相应的基因开放和关闭)相对较大；谣 游仆虫形成“毛基体菲吸收型包囊”时仅设枝了部分纤毛结构和服质微管结构， 大部分毛蒸体和部分微管结构棱保留下来。与蓠者相比，与缨胞结擒分化糨联系 的细胞基嚣组DNA的功能活动变化例如相应斡基因开放和关闭)摆对较小， 濯此，“毛纂体吸收型魁囊”腮包囊过程可能比“毛基体非吸收型包囊”更为复 杂。 从电泳图谱中可以看出，不仅有共事祭带和特异往条带，而且条带存在明亮 藏赔淡的差异。推测其原因是：在纤毛虫形成包囊过程中，大核基因组和线粒体 基因组不仅会激活或关闭某些基因，使RAID中扩增出共事片段和特异性片段， 而且大核DNA和线粒体DNA可能也会逶过基嚣扩增，在短期内大量产生