GSTpull-down结合质谱筛选猪圆环病毒2型ORF4.PDF

40 生 物 工 程 学 报 林翠 等/GST pull-down 结合质谱筛选猪圆环病毒2 型ORF4 潜在互作蛋白 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Jan. 25, 2019, 35(1): 40−48 DOI: 10.13345/j.cjb.180098 ©2019 Chin J Biotech, All rights reserved ·动物及兽医生物技术· GST pull-down 2 ORF4 1 1 1,2 1 1 1 1 林翠 ，唐雯 ，顾金燕 ，金玉兰 ，董伟仁 ，廖敏 ，周继勇 1 浙江大学 动物科学学院 农业部动物病毒学重点实验室，浙江 杭州 310058 2 南京农业大学 免疫研究所，江苏 南京 210000 林翠, 唐雯, 顾金燕, 等. GST pull-down 结合质谱筛选猪圆环病毒2 型ORF4 潜在互作蛋白. 生物工程学报, 2019, 35(1): 40–48. Lin C, Tang W, Gu JY, et al. Combination of mass spectrometry and GST pull-down techniques to study potential interacting protein of PCV2 ORF4. Chin J Biotech, 2019, 35(1): 40–48. 摘 要: 猪圆环病毒 2 型编码的ORF4 蛋白是近年来发现的新蛋白。迄今为止，人们对 ORF4 所参与的细胞生 物学过程知之甚少。本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST ，再将ORF4 基因插入该载 体中，形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4 。将质粒转染293T 细胞表达ORF4 后，通过 GST Pull-down 试验捕获细胞 内潜在与ORF4 互作的蛋白库。经SDS分离及银染后，对所得的特异性条带进行质谱鉴定，筛选出 5 个 与ORF4 潜在互作的蛋白，包括丝氨酸/ 苏氨酸蛋白磷酸酶6 催化亚基、α 心肌蛋白、β肌动蛋白、SEC-14 样蛋 白5 和肌球蛋白myosin 9 。上述研究结果为深入揭示ORF4 在病毒感染细胞过程中发挥的作用提供新的思路与 方向。 : 猪圆环病毒 2 型，ORF4 蛋白，GST pull-down ，互作蛋白 Received: March 17, 2018; Accepted: May 16, 2018 Supported by: Key Technologies Research and Development Program of China (No. 2015BAD12B01), National Natural Science Foundation of China (No.. Corresponding author: Jiyong Zhou. Tel: +86-571 E-mail: jyzhou@ 国家科技支撑计划项目课题 (No. 2015BAD12B01) ，国家自然科学基金 (No. 资助。 网络出版时间：2018-06-25 网络出版地址：/kcms/detail/11.1998.Q1157.002.html 林翠 等/GST