肺炎克雷伯菌中若干β内酰胺酶基因分布及耐药性的初步研究生物学专业论文.docxVIP

温州医科大学硕士学位论文 温州医科大学硕士学位论文 新基因型进行初步的亚细胞定位。 【结果】 1．从数据库收集到75条B．内酰胺酶基因。 2．solexa测序结果和数据库收集到的B．内酰胺酶基因比对后，肺炎克雷伯菌中存 在的B．内酰胺酶基因有blacARe、blaKPC、blOKLUC、blaLEN、blaNDM、blaoKP．A、blaz、 blab．A、blasnv、blaTME、blacTx．M．9群、blacxx．M．1群和blaoxv。 3．选取blacARB、blaKPc、blaKLUC及blaLEN这四个B．内酰胺酶耐药基因设引物， 通过PCR及测序。在240株肺炎克雷伯菌中，筛选出携带b／aKpc基因的9株， 阳性检出率为3．75％；携带blaLEN基因的4株，阳性检出率为1．67％；携带blacgP．B 基因l株，阳性检出率为0．42％：携带blaKⅢc基因的1株检出率为0．42％。其 中有一株菌同时携带blaLEN、blacARB和blaKLuc三个基因。 4．通过琼脂稀释法检测携带p．内酰胺酶基因的肺炎克雷伯菌对不同p．内酰胺类 抗生素药物的敏感程度。结果显示，携带blctKpc基因的9株肺炎克雷伯菌和同时 携带blaLEN、blacARB和blaKLUC三个基因的菌株KPl276比只携带blaLEN基因的 菌株明显耐B．内酰胺酶类抗生素药物。而携带blaKPC基因的菌株又比同时携带 blaLEN、blacARB和blaKLuc三个基因的菌株以及只携带blaLEN基因的菌株更容易 水解碳青霉烯类抗生素(亚胺培南和美罗培南)。 5．通过克隆表达实验成功构建15株克隆菌：其中携带blaKLUC基因的1株，携 带blacARB基因的l株，携带blaLEN基因的4株，携带blaKPc基因的9株。说明 blacmiB、bloKPC、blarLuc及blaI剧基因与细菌的多重耐药性有关。 6．接合转移实验得到了1株携带blareuc基因的接合子、3株携带blaKPC基因的 接合子。通过检测16srRNA确认这四株菌均为大肠杆菌EC600。用琼脂稀释法 对比接合子和原始菌以及受体菌E．coli EC600的药物敏感程度。发现对B．内酰胺 类药物氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西林和头孢吡肟，接合子比受体菌E．coli EC600 高了5到9个耐药梯度。 7．本次实验在肺炎克雷伯菌中发现了1株携带blaKEuc基因的菌株，这株菌还同 时携带blaLES基因和blaCARB基因。对这株菌进行克隆实验和接合转移实验说明 blaKLCC基因与细菌的多重耐药性有关。对接合转移成功菌株E．coli EC600．blaKLVC．KPl276做S1．PFGE，结果显示KPl276成功转移一个质粒至 EC600，可初步确定blaKLuc存在于质粒上。 【结论】 1．肺炎克雷伯菌中稀有p内酰胺酶耐药基因的低阳性检出率与高通量测序技术 以及生物信息学技术得到的丰度图结果较为一致，这使我们能够在短时间内利用 大规模基因组测序，来探索基因结构与病原菌耐药性的关系，对于致病菌中耐药 万方数据 温州医科大学硕士学位论文 温州医科大学硕士学位论文 基因的分布及新基因的发掘和功能研究起着极为有效的作用，为新药的研制与开 发提供了新的思路。 2．本次实验共筛选出9株携带blaKpc基因、4株携带blaLEN基因、1株blacARB 基因和1株携带blaKLUC基因的肺炎克雷伯菌，其中有一株有菌同时携带blaLEN 基因，blacARB基因和blaKLUC基因。 3．成功构建克隆表达载体并对其进行药敏检测，确定我们发现的基因型确实是 与细菌多重耐药性有关的。 4．本次实验在肺炎克雷伯菌中发现了l株携带blaKLuc基因的菌株，这株菌还同 时携带blaLEN基因和blacARB基因。对这株菌进行克隆实验和接合转移实验说明 blaxLuC基因与细菌的多重耐药性有关。对接合转移成功菌株E．coli EC600一blaKLuc—KPl276做SI．PFGE，结果显示KPl276成功转移一个质粒至 EC600，可初步确定blaKLuC存在于质粒上。 【关键词】 肺炎克雷伯菌B．内酰胺类基因 高通量测序最低抑菌浓度 万方数据 温州医科大学硕士学位论文Study 温州医科大学硕士学位论文 Study on Distribution and Drug Desistance o邛‘lactams Gene in Klebsiella pneumoniae Abstract objective This paper mainly studies the most clinically important pathogens of Klebsiella pneumoniae in