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河南师范大学本科毕业论文 河南师范大学 河南师范大学 本科毕业论文 学号： 0904314065 罗非鱼肝脏ATP酶活性测定 及推测其对罗非鱼不耐低温的影响 学院名称： 水产学院 专业名称： 水产养殖 年级班别： 09级水产1班 姓 名： 邢 莽 指导教师： 李学军 2013年2月 罗非鱼肝脏ATP酶活性测定 及推测其对罗非鱼不耐低温的影响 摘 要：本文以罗非鱼为实验对象，在室内可控环境下，研究了不同温度下罗非鱼肝脏ATP酶活性。实验设定的4个温度阶梯组为9℃（常温）、15℃、19℃、22℃，以及两次极性测试，养殖7天后取样。测定罗非鱼肝脏Na+-K+-ATPase、Mg++-ATPase、Ca++-ATPase、Ca++Mg++-ATPase的活性。实验结果：Na+-K+-ATPase、Ca++Mg++-ATPase在15℃时活性非常高，与其他温度差异明显；Mg++-ATPase、Ca++-ATPase的活性在9℃（常温）时比其他温度高，但是差异没Na+-K+-ATPase、Ca++Mg++-ATPase如此明显。结论：Na+-K+-ATPase、Ca++Mg++-ATPase活性可能是影响罗非鱼不耐低温的因素。 关键字：罗非鱼；匀浆；线粒体提取，酶促反应；定磷；ATP酶活性；不耐低温。 前 言 罗非鱼为一种中小形鱼。现在它是世界水产业的重点科研培养的淡水养殖鱼类，且被誉为未来动物性蛋白质的主要来源之一。原产于非洲，属于慈鲷科之热带鱼类，和 HYPERLINK /view/24706.htm \t _blank 鲈鱼相似。通常生活于淡水中，也能生活于不同盐份含量的咸水中，可以存活于在湖，河，池塘的浅水中。它有很强的适应能力，。绝大部分罗非鱼是杂食性，常吃水中植物和碎物。此鱼在面积狭小之水域中亦能繁殖。甚至在水稻田里能够生长。罗非鱼是以植物为主的杂食性鱼类，其次是浮游植物、浮游动物和少量底栖动物。罗非鱼耐低氧能力很强，窒息点为0.07～0.23毫克/升，水中溶氧1.6毫克/升时，罗非鱼仍能生活和繁殖。罗非鱼性成熟早，产卵周期短，口腔孵育幼鱼，繁殖条件要求不高。罗非鱼的生存温度范围为15～35℃。当水温低于15℃时，罗非鱼处于休眠状态。罗非鱼最高临界温度约40～41℃，最适宜生长温度为28～32℃，罗非鱼繁殖温度在20℃以上。笔者对4个实验温度阶梯下罗非鱼肝脏Na+-K+-ATPase、Mg++-ATPase、Ca++-ATPase、Ca++Mg++-ATPase 四种ATP酶进行活性测定，试比较分析ATP酶活性对于罗非鱼不耐低温是否有影响。 1 材料和方法 1.1 实验试剂与仪器 HH系列恒温水浴锅（江苏金坛中大仪器厂）；中佳SC-04低速离心机；中佳KDC-160HR高温冷冻离心机；722S可见分光光度计；ATP酶测试盒50T(南京建成生物工程研究所第一分所)；罗非鱼（河南师范大学水产养殖基地） 1.2 实验鱼肝脏提取 选择罗非鱼120条，分成4组，每组30条，养于4个鱼池。4个鱼池分别设置温度为15℃，19℃，22℃和常温。 至少养殖一个星期。 到达限定时间后，解剖全部30条罗非鱼,取其肝脏放于离心管中，编号1-30，待用。 1.3 肝组织匀浆的制备 取肝脏在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重取0.5g于烧杯中，用移液管量取0.86%的冷生理盐水，生理盐水的体积总量应该是组织重量的9倍，即4.5g（450ul），用移液枪量取总量的2/3的生理盐水于烧杯中，用眼科小剪刀尽快剪碎肝脏组织块。将剪碎的肝脏组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3冷生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的烧杯中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使肝脏组织匀浆化（10%组织匀浆），放入离心管中待用。将全部离心管编号1-30。 1.4 线粒体的提取 将制备好的10%的肝组织匀浆，以1000r/min（中佳SC-04低速离心机）离心10分钟，弃沉淀，取上清液以10000r/min（中佳KDC-160HR高温冷冻离心机）离心15分钟，沉淀物为线粒体。 用移液枪量取1000ul冷生理盐水加到分离的线粒体中，制备成混悬液，将混悬液倒入玻璃匀浆管中，仍然用手工匀浆的方法匀浆，使线粒体破碎，待测酶活力（共30个样本）。 1.5 50T试剂组成与配置（南京建成生