达卢生坦外消旋体的手性拆分及其体内外代谢研究药物分析学专业论文.docxVIP

目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 研究论文达卢生坦外消旋体的手性拆分及其体内外代谢研究 弓I言引青 ··· ·” ··” ” ” · ”8”8 第一部分达卢生坦外消旋体的HPLC法手性拆分及含量测定 前言刖舌 1010 材料与方法 10 结果 · “12 附图 ·一 ”·· · ·16 附表 18 讨论 21 d、结 ·· ” 一 · ··21 参考文献 ·-21 第二部分达卢生坦体外代谢研究 前言日{J茸 “ ” ”2323 材料与方法 23 结果 29 l村l羽 3 1 讨论 39 4、结 ·“ · ·” ·” “ ··” ” 39 参考文献 ·39 第三部分达卢生坦体内代谢研究 前言日U吾 4141 材料与方法 ．．4l 结果” · ·“- ·” · ·”” ．．46 I咐l虱 5 l I；f寸表 67 讨论 ·” ··” · ” · ··”“ · ” ．． · ．69 小结 · · ．70 参 参 ¨ ¨ ～ 一 ～ ～～ 一 ～¨ ～ 7 O 结论 7 1 综述 ¨二1 ¨p～ 72 致谢 文～性～ 献～药～ ～物～ ¨ ¨ ～谢～ 一硼一 ～究～ ～概～～况～ ～与～ ～进～¨生¨ ～展～ 82 个人 简 考～手～历 ～ ～ ¨ ¨ ～ 一 ～ ～ ～ ～ ～¨ ～ 83 中文摘要达卢生坦外消旋体的手性拆分及其体内外代谢研究 中文摘要 达卢生坦外消旋体的手性拆分及其体内外代谢研究 摘 要 达卢生坦(darusentan,LU 135252)化学名为(+)．(S)．2．[(4，6．二甲氧基 嘧啶)．2．氧基】．3。甲氧基．3，3．二苯基丙酸，为选择性内皮素受体拮抗剂，单 独用药可显著降低II级高血压患者的血压，与其他降压药物联用可有效降 低顽固性高血压患者的血压。目前达卢生坦外消旋体的手性拆分未见报 道，为了实现对达卢生坦的质量控制，本研究首次使用ES．OVM柱对达卢 生坦外消旋体进行手性拆分和含量测定。 药物的生物转化又称为药物代谢，本研究从体外代谢入手，进行大鼠 肝微粒体温孵、微生物转化，肠内菌厌氧培养，模拟体内代谢过程，并尽 可能的制备转化产物。液相色谱．质谱联用技术(HPLC．MS)具有专属、快 速、灵敏等优点，是混合物中化学成分定性和定量分析的有力工具。本研 究即采用HPLC-MS技术，对大鼠尿液、粪便、胆汁、血浆和组织中的代 谢物进行分析，并对其结构和代谢途径进行推断。 第一部分达卢生坦外消旋体的ItPLC法手性拆分及含量测定 目的：建立HPLC法拆分外消旋达卢生坦对映体，并进行含量测定。 方法：采用ES．OVM柱(4．6 mmxl50 rnln，5 orn)，以30 mmol／L磷酸盐 缓冲液QH 3．35)．乙腈(60：40)为流动相，流速0．8 ml／min，柱温20。C，检测 波长248 11In。 结果：建立了拆分外消旋达卢生坦对映体的HPLC方法，并进行了含 量测定。达卢生坦及其㈣．异构体均在0．01~0．10 mg／ml浓度范围内线性关 系良好。平均回收率为99．6％和99．5％，RSD为0．75％和0．82％。最低检测 限1 ng。 结论：该法准确，灵敏，可用于外消旋达卢生坦的手性拆分及含量测 定，也为其以后进行药物代谢动力学研究奠定基础。 第二部分达卢生坦体外代谢研究 中文摘要目的：通过模拟体内代谢过程的离体实验研究达卢生坦的体外代谢。 中文摘要 目的：通过模拟体内代谢过程的离体实验研究达卢生坦的体外代谢。 应用微生物转化、肠道菌厌氧培养、肝微粒体温孵等多种方法寻找达卢生 坦的代谢物，并尽可能的制备转化产物。 方法：(1)微生物转化实验：HPLC法从12种真菌中筛选出对达卢生 坦有转化能力的菌株，色谱条件：反相C18柱，流动相为A(甲醇)．B(O．025％ 甲酸水)，梯度洗脱：0．25 min，10％A_70％A；25．55 min，70％A．~86％A； 55．60 min，86％A．--98％A；60．70 min，98％A；后运行8 min。柱温为25。C， 流速为1 ml／min。分离制备代谢物，并对代谢物通过电喷雾离子源正离子 和负离子模式进行一级质谱扫描、子离子扫描，对其结构进行推断。(2) 肠道菌培养：取大鼠粪便，利用文献报道肠道菌厌氧培养的方法，研究达 卢生坦的代谢。(3)肝微粒温孵实验：根据文献报道的方法将达卢生坦加 入微粒体温孵液中，温孵一定时间后，处理样品并采用HPLC．DAD和多 离子反应监测．信息依赖．增强型子离子扫描(MRM．IDA．EPI)模式分析体 内代谢生物样品。根据产生的碎片离子信息推测化合物的结构。色谱条件： 反相C18柱，流动相为A(含0．05％甲酸的甲醇)一B(O．05％甲酸水)梯度洗脱： 0-5 min，20％A