trail诱导细胞凋亡的分子机制研究遗传学专业论文.docxVIP

中国协和医科大学博士研究生学位论文 中国协和医科大学博士研究生学位论文 中文摘要 中文摘要 f死亡受体(Death Receptor 4，DR4)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成 ＼ 员，其分子中具有富含半胱氨酸的胞外结构域和胞内死亡结构域(death domain，DD)。 DR4与其配体Ap02L／TRAIL(Ape2 ligand or TNF—related apoptosis inducing 1 igand) 结合后，可激活效应分子天冬蛋白酶(caspase)，并诱导细胞凋亡。但是从死亡受体 、“ DR4或DR5接受TRAIL的刺激到效应物天冬蛋白酶的信号传递途径尚不清楚。尸一 本研究的第一部分采用酵母双杂交体系，克隆DR4死亡结构域的结合蛋白，为进 一步探讨DR4介导的信号传导途径提供新的资料。首先以TRAIL盈薹：曼焦DR4的死亡 结构域DR4DD(Death Domain of DR4)作为钓饵，筛选人白细胞MATCHMAKER cDNA 文库，应用DNA序列测定及计算机分析软件等手段对所得到的阳性克隆的插入片断进 ， 行分析。眙果共获得两个阳性克隆：pADBI和pADB2。DNA测序结果分析表明：pADBi 、 的插入片断与人类甲酰肽受体l(formyl peptide receptor一¨ke 1(FPRLl))的mRNA 具有97％的同源性，其编码的氨基酸序列与人类甲酰肽受体l具有100％的同源性。 pADB2的插入片断与已知序列无同源性。 为了验证FPRLl是否能在体内外与DR4胞内区DR4CD(the cytoplasmic domain of DR4)特异性结合，进一步采用蛋白质体外结合实验(pull-down)和蛋白质体内 结合实验(免疫共沉淀方法)分别证明了DR4CD与FPRi在体内外均能特异性结合。 为了探讨FPRLI是否在TRAIL和DR4诱导的细胞凋亡中发挥作用，将FPRLI克隆到真 核表达载体pcDNA6／V5-HisB—HA的}iA标签下游，并转染HEK 293T细胞，瞬时表达 FPRLl， 观察到转染有FPRLl的细胞对Ap02L／TRAIL处理的敏感性降低。 以 划乒步俐百n日 甲酰肽受体1(FPRLl)是DR4的特异性结合蛋白，参与了DR4介 导的细胞凋亡信号传递，其生物学功能是降低细胞对Ap02L／TRAIL的敏感性，从而对 卫△也诱导的塑堕墼起保护作用。同时提示DR4介导的细胞凋亡信号传递途径与G 蛋白偶联受体家族的FPRLi介导的信号传递途径之间存在交叉反应(cross-talk)。 中国协和医科大学博士研究生学位论文 中国协和医科大学博士研究生学位论文 中文摘要 本研究的第二部分以登丝绁照为研究对象，用TRAIL联合蛋白质合成抑制剂放 线菌酮(cycloheximide，CHX)或放线菌素D(actinomycin，ACTD)刺激不同的神经 细胞系，结果表明TRAIL诱导神经细胞凋亡具有细胞类型特异性，CHX和ACTD都 可以显著加强细胞对TRAIL的敏感性，为进一步揭示TRAIL诱导细胞凋亡的信号传 递途径以及肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性机制提供了新的资料和线索。 2 中国协和医科大学博士研究生学位论文 中国协和医科大学博士研究生学位论文 英文摘要 ——●——H———_—H———_——_——_H—●——___—_——_h—_——_———-——__h———_——●—-———_——————————————一一一 Abstract DR4(Death Receptor 4)bdongs to the tumor necrosis factor receptor(TNFR) gene family，which is defined by similar，cysteine-rich extraceUular domain and a homologous cytoplasmic sequence termed as‘‘death domain”．DR4 Call transmit apoptosis signal initiated by Ap02L／TRAIL仃小Ⅲ-related apoptosis inducing ligand)It Can activate caspases within seconds of ligand binding and cause an apoptotie demise ofthe cell within hours．Despite several investigations，the mechanisms of apoptosis initiation by Ap02L／TRA／L remain unclear