温泉鱼类志贺邻单胞菌病检疫技术规范..doc

ICS FORMTEXT 点击此处添加ICS号 FORMTEXT 点击此处添加中国标准文献分类号 FORMTEXT FORMTEXT 中华人民共和国 FORMTEXT 出入境检验检疫行业标准 FORMTEXT XX/T FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 温泉鱼类志贺邻单胞菌病检疫技术规范 FORMTEXT Quarantine Protocol for Plesiomonas Shigelloides from Garra Rufa FORMTEXT 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 FORMDROPDOWN FORMTEXT （本稿完成日期：2011年8月19日星期五） FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 发布 XX/T XXXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT 6 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准按照SN/T 2384—2009 动物检疫标准英文用语翻译规范起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国四川出入境检验检疫局、四川农业大学、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：余华、杨光友、王昱、严玉宝、陈世界、何智、胡娟、崔鹏博、彭雪蓉、周岷江。 温泉鱼类志贺邻单胞菌病检疫技术规范 范围 本标准规定了淡红墨头鱼类志贺邻单胞菌病临床诊断和实验室诊断，实验室诊断包括细菌分离、生理生化鉴定。 本标准适用于淡红墨头鱼类志贺邻单胞菌病的检疫。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 临床诊断 临床症状 鱼群出现厌食或不吃食情形。 鱼体出现体色异常。 鱼出现静止不动或阵发性乱游、乱窜，或在池边摩擦，最后衰竭而死情形。 死鱼有较明显的出血症状。 病理变化 鳍条基部及鱼体两侧轻度充血，体表侧线两侧出现白斑或溃疡斑，随着病情的加重，斑的颜色逐渐变深。 鳃盖周围有出血点或出血斑。 鳃、肝、肾的颜色均较淡。 肝脏出现出血点，胆囊肿大。 腹腔内积有腹水，腹水呈淡黄色透明或红色浑浊。 肠道出血或肠壁变透明，可见肠内容物。 实验室诊断 设备和器械 超净工作台。 普通光学显微镜(具油镜、暗视野)。 高压灭菌锅。 恒温培养箱（28 ℃±1 ℃ 解剖器械。 培养基和试剂 普通营养琼脂平板，见附录A.1。 革兰氏染色液。 SIM培养基。 吲哚试剂。 触酶试剂。 氧化酶试剂。 BBL Oxi/Ferm Tube II生化反应管。 病原菌分离 样品采集 挑选5尾-10尾濒死的或带有疑似临床症状的淡红墨头鱼，要求发病鱼样品新鲜无腐败和污染，症状、病变典型。对发病淡红墨头鱼使用无菌水冲洗体表后，用75 %的酒精棉球擦拭体表，无菌操作解剖发病淡红墨头鱼，采用接种环从病鱼出血点或出血斑处、肝脏、脾脏和肾脏蘸取渗出物。 分离纯化培养 接种环划线接种到普通营养琼脂平板培养基，28 ℃恒温培养24 h。随机挑取数个单个菌落，分别在普通营养琼脂平板培养基上28℃恒温 病原菌鉴定 形态观察和染色镜检 接种于普通营养琼脂平板的纯菌落生长良好，形成边缘整齐、表面湿润、中央隆起、光滑、半透明、灰白色至淡黄色的圆形菌落。 挑取单菌落涂片到干净的玻璃载玻片，在酒精灯火焰上方固定，滴加结晶紫染色液，染１min，水洗；滴加革兰氏碘液，作用１min，水洗；滴加95 %乙醇脱色，约30s（或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10 s）水洗；滴加沙黄复染液，复染１min；水洗，风干，镜检。淡红墨头鱼类志贺邻单胞菌为革兰氏阴性直杆菌，两端圆润。 运动性和吲哚试验 取纯菌落穿刺接种SIM培养基，37 ℃培养24 h，观察。细菌沿穿刺线向两侧扩增者为具运动性，否则为不具运动性；往管中加入数滴氯仿（此时不要与火接触），2 min后 氧化酶试验 挑取少许单菌落涂抹于无菌的白色的滤纸片上，滴加1 ％盐酸四甲基对苯二胺（或商品化）氧化酶试剂于菌落之上，15 s-30 s呈深紫色到暗绿色为阳性，否则为阴性。 触酶试验 挑取少许单菌落涂抹于干净的载玻片上，滴加2-3滴3 %过氧乙酸（或商品化）触酶试剂，10 s-20 s出现大量气泡者为阳性，否则为阴性。 其他生理生化试验 取氧化酶反应阳性的菌落接种到BBL Oxi/Ferm Tube