从芋螺基因组中分离克隆毒素基因的研究水产养殖海洋生物技术研究方向专业论文.docxVIP

Ill Ill I t II III II II I I II 111 ；Y1 933357 海南大学学位论文原创性声明和使用授权说H月 原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取 得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写 过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名： 妊似 吼伽l f年‘月7日 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大 学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海 南大学。 做兢在 孵 储翟糍帆”～辄年～一确黧蒹唑 躲曼名弘～ 哆“～罗‘～ 签 本人已经认真阅读“CALLS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文 提交“CALLS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。匝 论文作者签名：耘 一名：歹耄≤导师签名： 岁d j， 日期：秒“年名月 日期．加f f年多月7 El ，1‘i：∥ ，1‘i：∥ 摘 摘 要 芋螺毒素(conotoxin，conopeptide，简称cax)是一大类活性多肽，它们是生 活于热带海洋中软体动物芋螺(Conus)的毒管分泌出的毒液中的主要成分，用以 麻弊猎物以及防御攻击。近几十年来的研究表明，CTX通常由7~46个氨基酸残 基组成，富含半胱氨酸(Cys)，具有动物神经肽毒素活性的一类小肽。它们分子 量小，化学结构多样，功能独特、专一，生物活性极强，作用靶位广泛且选择性 强，已逐渐成为神经科学研究的有利工具以及新药开发的重要来源。 目前发现的芋螺毒素主要根据其信号肽序列的和二硫键连接方式的不同，可 分为A．，TI，O．，M．，P．，I一和S．超家族等。由于CTX是基因直接表达的产物， 现代基因工程技术促进了CTX的研究与开发。目前，根据0【．CTX基因和0．CTX 基因的信号肽保守序列、内含子保守序列及3 7．UTR序列，分别设计两类毒 素基因的特异PCR引物，从芋螺基因组DNA和cDNA文库中筛选新型的洳 CTX基因和O．CTX基因，成为发现新型两类毒素基因的重要方法。 据此，本研究分别根据已知的Q—CTX基因和O—CTX基因各自信号肽保守序 列和内含子保守序列及3’．UTR序列，设计多组特异PCR引物，以桶形芋螺(C． betulinus Linnaeus)、疣缟芋螺(C．1ividus Hwass)、织锦芋螺(C．textile Linnaeus)的 基因组DNA为模板，进行PCR扩增并进行PCR条件的优化。扩增所获得的基 因片段经测序并推导相应编码产生的毒素肽氨基酸序列，然后与已知的毒素基因 序列比对。结果表明，从三种芋螺中分别筛选出37条a—CTX基因(含35条新 型仅．CTX基因以及2条已报道的0【．CTX基因)、从疣缟芋螺(C．1ividus Hwass)中 筛选出3条0．CTX基因，为更多Ⅸ。CTX和0．CTX的发现、化学合成、活性鉴 定和应用研究提供基础。 ．关键词：芋螺毒素；基因组DNA：信号肽序列；内含子序列；保守性；芋螺毒 素基因克隆 A．bstractConotoxins(conopeptide)are A．bstract Conotoxins(conopeptide)are biologically active peptides from the venom of the venomous marine cone snails，which can help them to hocus their prey and defense． Recent researches suggest that,the conotoxins al e consisted of 7．46锄ino acid residue with cysteine-rich．They are distinctive by their small molecular wei出， varied and novel chemical structure，strong biological activity and high selectivity on ion channels or receptors．Thus，conopeptide have attracted extensive attent