佛波酯对人肺腺癌a549细胞增殖和侵袭能力的影响药理学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取 得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发 表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明 确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期：勿／／年彩月≥日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务，作品，知识产权归属郑州大学。根 据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构 送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学 位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手 段保存论文或汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接 相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守 此规定。 学位论文作者： 日期：劢／／年彩月乙日 中文摘要佛波酯对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响 中文摘要 佛波酯对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响 研究生 吴晓东1 导师 郭玉忠1副教授 韩正涛2研究员 1郑州大学基础医学院临床药理学教研室 2河南省肿瘤医院 河南郑州450052 摘要 12．氧一十四烷酰佛波醇．13．乙酸酯(12．O．tetradecanoyllphorbol。13．acetate， TPA)是佛波酯类化合物中活性较高的一种，具有诱导多种肿瘤细胞分化的作 用。TPA在诱导肺腺癌细胞分化的同时对细胞功能方面的影响尚未见报道，如 粘附能力、迁移运动、侵袭能力等。 目的 主要观察TPA对人肺腺癌A549细胞在迁移运动能力、侵袭能力和对顺铂 敏感性等方面的影响。 方法 1细胞培养所用细胞均在环境条件为37*(2±O．3。C、相对湿度≥95％、C02 浓度5％±0．1％的细胞培养箱内用含10％胎牛血清的RPMll640培养基传代培 养。实验所用的细胞为A549细胞、A549／TPA细胞、A549／R．CDDP细胞。 A549／TPA细胞：A549细胞用含5ng／ml TPA、10％胎牛血清的RPMll640传代 培养，9个月后筛选出的能够在含5ng／ml TPA的培养基中稳定贴壁生长的细胞。 然后用含5ng／ml TPA的培养基传代培养，用于实验。 A549／R-CDDP细胞：A549细胞用含不同浓度顺铂、10％胎牛血清的RPMll640 培养10个月后，筛选出能够在含21ag／ml顺铂的培养基中稳定生长的细胞，耐 药倍数达10倍以上，可以认为是耐顺铂的A549细胞。然后用含21xg／ml顺铂 中文摘要的培养基传代培养，用于实验。 中文摘要 的培养基传代培养，用于实验。 2实验方法应用MTTL卜,色法、人工细胞计数法、平板克隆形成实验观察TPA 对细胞增殖特性和细胞形态的影响。用流式细胞仪并结合免疫细胞化学的方法， 判断TPA对细胞周期的影响。用MTT比,色法测定TPA联合顺铂对A549细胞的敏感 性。用细胞计数的方法测定细胞对人工基底膜的粘附能力、运动能力，对Transwell 侵袭小室的侵袭能力，用流式细胞仪测定趋化因子受体(CXCR4)表达的变化。 厶}电-‘1：1木 1 TPA对细胞增殖特性的影响肼实验结果表明，A549细胞用TPA lng／ml、 5ng／ml处理组的抑制率与对照组相比无统计学差异，TPA lOng／ml处理组与对照 组相比有统计学差异。TPA对A549细胞时间依赖关系分析，TPA 5ng／ml处理组从 第3天开始出现有大量的悬浮细胞，而对照组无此现象；A549／TPA细胞的TPA 5ng／ml处理组从第4天开始与对照组存在统计学差异，且失去对数生长的特性， 单位面积的细胞密度降低，7天后A549／TPA细胞密度是对照组的27．31％。平板克 隆形成实验的结果显示A549细胞用TPA lng／ml、5ng／ml处理组存活分数与对照组 相比分别降低44．20％、72．10％，A549／TPA细胞的TPA 5n咖l处理组的存活分数 与对照组相比降低52．30％。 2 TPA对细胞形态学的影响平板克隆形成实验中，A549细胞的TPA lng／ml、 5n咖l处理组和A549／TPA细胞组都存在细胞质出现空泡或类似网球拍状的空泡 细胞现象，而对照组无此现象。A549细胞的TPA lng／ml、5ng／ml处理组的空泡细 胞所占整个克隆集落的比例分别为8．41％、26．38％。 3 TPA对细胞周期Go期和Gl期的影响 结果显示，TPA促进A549细胞的Go期细 胞进入Gl期并把A549细胞